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【6h】

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后松果体中microRNA表达谱变化及miR-375对松果体功能的影响

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目的：通过制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型，检测脑损伤后大鼠松果体中microRNA的表达谱变化；并进行松果体细胞培养，建立细胞缺氧缺糖模型，用miR-375慢病毒载体转染细胞，检测转染效率及松果体功能的变化，探讨miR-375在缺氧缺糖中对松果体功能的影响。
　　方法：采用7日龄SD新生大鼠，根据改良Rice-Vannucci法建立HIBD模型。将新生大鼠随机分为假手术组（Sham组）、缺氧缺血组（HIBD组），采用基因芯片及RT-qPCR法检测HIBD后24h大鼠松果体中microRNA表达谱的变化；采用新生24h以内的SD大鼠进行松果体培养，行氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation，OGD)的处理方法，模拟缺氧缺血模型。选取氧糖剥夺后0h、12h、24h、48h、72h、96h六个时间点，RT-qPCR测定氧糖剥夺前后AANAT mRNA及miR-375表达的变化；ELISA法检测褪黑素（MT）水平的变化；用CCK8法检测细胞活性。采用miR-375慢病毒载体转染后，行上述实验，初步探讨松果体中microRNA在缺氧缺血性脑损伤中的可能机制。
　　结果：
　　1、芯片及RT-qPCR结果显示，新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后松果体中microRNA表达谱发生变化。
　　2、RT-qPCR结果显示，缺氧缺糖后miR-375表达上调，24h达到高峰后下降，72h趋向0h水平；AANAT表达下调，12h左右达最低点，72h趋向0h水平；miR-375慢病毒转染细胞后miR-375表达明显上调，72h趋于稳定；AANAT表达下调，48h趋于稳定；miR-375慢病毒转染细胞后行缺氧缺糖实验，miR-375表达上调，24h达到高峰；AANAT表达下调，24h左右达最低点。
　　3、ELISA结果发现，缺氧缺糖后MT分泌水平下降，24h左右达最低点，96h左右恢复缺氧缺糖0h水平；miR-375慢病毒转染细胞后MT分泌水平下降，72h趋于稳定；miR-375慢病毒转染细胞后行缺氧缺糖实验，MT分泌水平下降，24h及48h之间达最低点。
　　4、CCK8结果显示，缺氧缺糖0.5h、1h后，细胞增长活力无明显变化，缺氧缺糖2h后，可使松果体细胞获得适度损伤，缺氧缺糖3h后，细胞活力明显下降。
　　结论：
　　1.新生大鼠HIBD后松果体microRNA表达谱发生改变,其中miR-375明显上调。
　　2.松果体细胞缺氧缺糖后miR-375、AANAT表达，分泌MT水平均发生变化。
　　3.松果体细胞缺氧缺糖损伤后，miR-375加重缺氧缺糖造成松果体功能的损害。
　　4.松果体细胞会随缺氧缺糖时间延长细胞活性下降。

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