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【6h】

高、低剂量率γ线照射对哺乳类细胞生长存活及DNA损伤修复的影响

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目的：通过高剂量率(high-dose-rate，or acute，1.0Gy/min)、低剂量率(low-dose rate，or chronic，0.347mGy/min)γ线对哺乳类细胞的照射，研究照射后哺乳类细胞的生长存活情况，探讨γ线引起的细胞损伤修复机制。
　　 方法：⑴采用Western Blot方法从蛋白水平检测DNA损伤调控因子P53、P21、磷酸化共济失调-毛细血管扩张症致病基因(Ataxia-Telangiectasia mutated，ATM)在本研究所用细胞中的表达，为下一步研究提供可行性。⑵血细胞计数板计数法测定低剂量率照射对细胞生长曲线的影响；克隆形成率测定指数增长期及密集抑制期细胞高、低剂量率照射下的存活率。⑶采用免疫荧光染色法检测有无ATM抑制剂及DNA依赖性蛋白激(DNA-dependent protein kinase，catalytic subunit，DNA-PKcs)抑制剂作用于密集抑制的稳相细胞照射后DNA双链断裂(DNA double-strand breaks，DSBs)的生物标记物γ-H2AX的免疫荧光表达。
　　 结果：①Western Blot结果显示：高剂量率(1.0Gy/min)5.0Gy照射后，三种哺乳类细胞中，磷酸化ATM均有表达，磷酸化P53、P21也有一定程度的诱导表达。②低剂量率照射组的HE-4细胞及MRC5-hTERT细胞相比较与未照射组生长速度减慢，而C3H10T1/2细胞没有明显变化；③指数增长期期细胞及密集抑制状态下高剂量率(1.0Gy/min)照射的细胞存活率均低于低剂量率(0.347mGy/min)照射。④高剂量率(1.0Gy/min)γ线照射密集抑制的稳相细胞后，随着培养时间的延长，细胞的存活率增高。⑤γ-H2AX免疫荧光染色提示ATM抑制剂及DNA-PKcs抑制剂处理后的密集抑制状态的细胞在高、低剂量率照射下的DSBs均高于对照组。
　　 结论：⑴磷酸化ATM、磷酸化P53、P21在照射后的细胞中均有表达。⑵高剂量率与低剂量率γ线对指数增长期及密集抑制状态下的细胞照射后，均存在明显的剂量依存关系；相同剂量照射，低剂量率照射下的细胞存活率显著高于高剂量率照射组。⑶低剂量率γ线照射下细胞的生长速度减慢，以人纤维细胞最为明显。⑷密集抑制的稳相细胞高剂量率γ线照射后存在潜在致死性损伤修复。⑸ATM在高、低剂量率γ线照射诱导的DSBs修复中均发挥重要作用。

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