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【6h】

SNCG的表达和定位及其在肝癌高低淋巴道转移细胞株中的差异

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目的：肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，转移是其恶性性质的突出表现.其转移的分子基础和病理机制尚不完全清楚，但肿瘤细胞向局部淋巴结转移对于许多原发性肿瘤可被认为是肿瘤转移的早期信号。本文以肝癌为出发点，研究和探讨肿瘤淋巴道转移的机制。本实验室此前通过对小鼠肝癌高/低淋巴道转移潜能细胞株Hca-F和Hca-P进行基因芯片和蛋白质组学方法的检测，发现神经突触核蛋白(SNCG)在高淋巴道转移潜能细胞株的mRNA水平高于低淋巴道转移潜能细胞株，提示该蛋白可能在肿瘤的淋巴道转移机制中起到重要作用。SNCG最初在乳腺癌中被发现为特异性高表达蛋白，近年来随着研究的深入，SNCG被发现在多种肿瘤的增殖、侵袭、转移和抗药性方面均起到不可忽视的作用。本文主要研究SNCG蛋白在小鼠肝癌高低淋巴道转移潜能细胞株中的定位和表达差异，以及SNCG蛋白在小鼠肝癌细胞株中与乳腺癌细胞株中的表达的差异，以探索SNCG在肿瘤淋巴道转移机制方面的作用，为进一步的研究奠定基础。
　　 方法：应用免疫细胞化学、Western Blot方法检测SNCG蛋白在小鼠肝癌高/低淋巴道转移潜能细胞株Hca-F/Hca-P的定位情况和表达差异，以细胞免疫荧光、Western Blot方法检测在SNCG基因融合标签蛋白FLAG转染小鼠乳腺癌细胞株4T1中，SNCG蛋白的定位和表达情况。
　　 结果：Hca-F和Hca-P细胞株的免疫细胞化学：SNCG蛋白在Hca-F和Hca-P细胞株中均有表达，高倍镜下可见目的蛋白主要定位于细胞浆，呈局部团块状不均匀表达状态，细胞核区域也可见少量蛋白表达。SNCG在Hca-F中的表达(染色强度为+++)强于在Hca-P中的表达(染色强度为++)。镜下随机选取10个视野，计数阳性表达细胞数，Hca-F中每100个细胞可见91个阳性细胞，Hca-P中每100个细胞可见74个阳性细胞，差异具有统计学意义(p=0.000)。
　　 Hca-F和Hca-P细胞株的Western Blot：在预染Marker约43kD处，检测到一条SNCG特异性蛋白条带，可能为SNCG三聚体或异聚体。软件分析SNCG蛋白在Hca-F、Hca-P细胞中表达的差异，用SNCG蛋白累积光密度值与内参β-actin累计光密度IOD相对值相比(IODSNCG/IODβ-actin)，SNCG在Hca-F细胞中表达量为Hca-P细胞中的1.9倍，差异具有统计学意义(p=0.016)。
　　 4T1细胞的Western Blot:SNCG-FLAG乳腺癌细胞分别在约13kD和23kD处显示出两条特异性条带，13kD处条带为SNCG单体，23kD处条带为SNCG二聚体。软件分析SNCG-FLAG单体及二聚体蛋白与β-actin累计光密度IOD相对值差异，SNCG二聚体蛋白表达量为单体的1.12倍，差异无统计学意义(p=0.06)。
　　 4T1细胞的细胞免疫荧光：细胞免疫荧光结果显示，Cy3在胞浆显示出强荧光，提示SNCG主要定位在胞浆中。在DAPI定位细胞核情况下，部分胞核区域也可见少量Cy3荧光显示，提示SNCG也可在胞核中少量表达。
　　 结论：
　　 1．SNCG蛋白在Hca-F细胞中的表达量高于Hca-P细胞中表达量1.9倍。
　　 2．SNCG蛋白在小鼠肝癌和乳腺癌细胞中可形成单体、二聚体或三聚体等聚合体。
　　 3．SNCG蛋白在小鼠肝癌和乳腺癌细胞中均主要定位于细胞浆，也有少量定位于细胞核。

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