重组日本七鳃鳗rLj—RGD3与其突变体蛋白类HRG的抗血管新生与抗真菌活性

声明

摘要

引言

1 文献综述

1．1 富组氨酸糖蛋白的结构特点

1．2 富组氨酸糖蛋白(HRG)的生物活性

1．2．1 调节血管新生

1．2．2 调节免疫复合物的清除和FcyR介导的吞噬作用

1．2．3 调节凝血和纤溶功能

1．2．4 调节细胞增殖和吸附

1．2．5 pH感受器和锌离子检测器

1．2．6 抑菌活性

1．3 结语

2 生物信息学分析

2．1 数据库与软件

2．2 方法

2．2．1 一级结构分析

2．2．2 二级结构预测

2．3 结果

2．3．1 野生型Lj-RGD3一级结构分析

2．3．2 野生型Lj-RGD3信号肽分析及其二级结构

3 野生型rLj-RGD3及其突变体蛋白的基因合成、蛋白的诱导表达、纯化及鉴定

3．1 材料、试剂

3．2 rLj-RGD3重组蛋白及其六种突变体蛋白的制备

3．2．1 六种突变体目的基因片段的合成

3．2．2 六种突变体重组质粒的提取

3．2．3 琼脂糖凝胶电泳

3．2．4 重组质粒转化入E．coli BL21表达菌中

3．2．4 提取质粒做基因测序检验

3．2．5 IPTG诱导表达蛋白

3．2．6 七种重组蛋白的表达及提纯

3．2．7 Tricine-SDS PAGE电泳

3．2．8 用考马斯亮蓝G-250法测定纯化蛋白的浓度

3．3 结果

3．3．1 野生型Lj-RGD3的蛋白序列比对分析

3．3．2 七种重组蛋白的cDNA序列合成及其推导的氨基酸序列

3．3．2 目的基因质粒的提取及表达菌的转化

3．3．3 七种重组蛋白的IPTG诱导表达

3．3．4 七种重组蛋白的纯化及鉴定

3．3．4 七种重组蛋白的蛋白质浓度测定

3．3 讨论

3．4 结论

4 rLj-RGD3与其六种突变体蛋白抗血管新生活性的比较

4．1 材料

4．2 方法

4．2．1 细胞培养

4．2．2 细胞增殖实验

4．2．3 鸡胚绒毛尿囊膜实验

4．2．4 HUVEC细胞的迁移实验

4．2．5 HUVEC细胞的浸润实验

4．3 结果

4．3．1 对bFGF诱导的HUVEC细胞增殖的抑制作用

4．3．2 对bFGF诱导的鸡绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的抑制作用

4．3．3 HUVEC细胞的迁移和浸润实验

4．4 讨论

5 rLj-112蛋白抗真菌活性的研究

5．1 材料

5．2 方法

5．2．1 用牛津杯法检测野生型rLj-RGD3及其突变体蛋白的抑菌活性

5．2．2 用稀释法测定rLj-112的最小抑菌浓度(MIC)及抑菌率

5．2．3 测定rLj-112的杀菌动力学(Time-kill)曲线

5．2．4 rLj-RGD3及突变体处理后白色念珠菌的扫描电镜观察

5．3 结果

5．3．1 用牛津杯法比较rLj-RGD3及各突变体蛋白的抑菌活性

5．3．2 用牛津杯法测定浓度梯度的突变体rLj-112的抑菌活性

5．3．3 最小抑菌浓度(MIC)及抑菌率的测定

5．3．4 测定rLj-112的杀菌动力学(Time-kill)曲线

5．3．5 rLj-RGD3及突变体处理后白色念珠菌的扫描电镜观察

5．4 讨论

结论及展望

本论文创新点

下一步研究计划

参考文献

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

附录

致谢