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第一章溶菌酶的研究进展
1溶菌酶的作用机理、应用及分子生物学研究
1.1溶菌酶的催化机制
1.2溶菌酶的应用
1.3溶菌酶的分子生物学研究
2 N，0-二乙酰胞壁质酶的性质研究
2.1 N，0-二乙酰胞壁质酶的生化性质
2.2 N，0-二乙酰胞壁质酶的分子生物学
3本课题立题依据及前景分析
第二章产溶菌酶菌株的筛选及16S rDNA的鉴定
1实验材料
1.1菌株、质粒及遗传特性
1.2主要试剂及培养基
2实验方法
2.1土样的采集及处理
2.2产溶菌酶菌株的筛选
2.3菌体基因组DNA的提取
2.4 PCR克隆基因组16S rDNA与序列分析
3结果与讨论
3.1土样的选择
3.2筛选得到的结果
3.3提取基因组DNA的实验结果
3.4 PCR的电泳试验结果
4本章小结
第三章溶菌酶保守区的克隆
1实验材料
1.1菌株、质粒及来源
1.2工具酶及试剂
2 CODEHOP PCR技术克隆溶菌酶基因的部分序列
2.1用于克隆放线菌溶菌酶基因保守区序列的CODEHOP引物设计
2.2 CODEHOP PCR扩增部分溶菌酶基因序列
3结果与讨论
3.1 CODEHOP PCR设计引物注意的问题
3.2 CODEHOP PCR试验结果
3.3溶菌酶基因保守区核苷酸序列的在线比对及相互比对结果
4本章小结
第四章全长溶菌酶基因的克隆及序列分析
1材料
1.1菌体与载体
1.2工具酶和试剂
2方法
2.1 TAIL-PCR扩增溶菌酶基因保守区段的上下游序列
2.2 TAIL-PCR巢式引物的设计
2.3 TAIL-PCR的反应体系和反应条件
2.4 TAIL-PCR产物的回收及序列分析
3试验结果及讨论
3.1 TAIL-PCR AD引物的设计
3.2 TAIL-PCR反应注意的问题
3.3 TAIL-PCR产物的特点
3.4溶菌酶基因全序列的拼接和分析
4本章小结
第五章溶菌酶基因在大肠杆菌中的表达及重组溶菌酶活性鉴定
1材料
1.1菌株与载体
1.2培养基、工具酶及试剂
2 PCR扩增某一株菌溶菌酶基因的成熟肽部分
2.1重组质粒的构建及鉴定
2.2重组质粒转化E.coli BL21(DE3)pLysS及筛选
2.3重组溶菌酶的酶学性质分析
3结果与讨论
3.1基因克隆至pET-26b(+)载体
3.2溶菌酶基因克隆至pET-26b(+)载体
3.3重组溶菌酶的酶学性质分析
4小结
下一步的工作计划
参考文献
致谢
附录
