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螺旋肽对金黄色葡萄球菌生物膜作用研究

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第一章 前言

1.1金黄色葡萄球菌简介

1.2细菌生物膜简介

1.3金黄色葡萄球菌生物膜简介

1.4 抗菌肽简介

1.4.1 抗菌肽来源

1.4.2 抗菌肽的抗菌作用机理

1.4.3 抗菌肽抗生物膜作用机理简介

1.4.4 抗菌肽作用于金黄色葡萄球菌生物膜的研究现状

1.5主要实验内容

第二章 螺旋肽的设计与合成以及性质表征

2.1 引言

2.2 实验方法

2.2.1 实验仪器与试剂

2.2.2 螺旋肽的设计合成

2.2.3 螺旋肽的合成与纯化

2.2.4 螺旋肽的高效液相色谱(HPLC)分析

2.2.5 螺旋肽的质谱分析

2.2.6 螺旋肽二级结构的测定

2.3实验结果与讨论

2.3.1螺旋肽纯度分析

2.3.2 螺旋肽的二级结构测定

2.3.3 小节

第三章 螺旋肽对游离金黄色葡萄球菌的杀伤作用

3.1 引言

3.2 实验方法

3.2.1 实验仪器与试剂

3.2.2 实验菌株与培养基

3.2.3螺旋肽对金黄色葡萄球菌的抗菌活性检测

3.2.4螺旋肽对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)毒性检测

3.2.5螺旋肽对哺乳动物红细胞溶血活性检测

3.2.6螺旋肽对游离金黄色葡萄球菌MIC的值测定

3.3实验结果与讨论

3.3.1抗金黄色葡萄球菌活性检测

3.3.2对NIH3T3细胞毒性检测

3.3.3对哺乳动物红细胞溶血活性检测

3.3.4对游离的金黄色葡萄球菌MIC值测定

3.3.5小结

第四章 螺旋肽抑制金黄色葡萄球菌生物膜活性检测

4.1 引言

4.2 实验方法

4.2.1 实验仪器与试剂

4.2.2 螺旋肽抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成

4.2.3 螺旋肽抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成作用机理研究

4.3 实验结果与讨论

4.3.1 螺旋肽抑制金黄色葡萄球菌形成结果

4.3.2螺旋肽抑制金黄色葡萄球菌形成机制

4.3.3 小结

第五章 螺旋肽对金黄色葡萄球菌生物膜的破坏作用

5.1 引言

5.2 实验方法

5.2.1 实验仪器与试剂

5.2.2 MTT法考察螺旋肽破坏金黄色葡萄球菌生物膜的形成

5.2.3死活染色法考察螺旋肽破坏金黄色葡萄球菌生物膜形成

5.2.4破坏生物膜反应器中的金黄色葡萄球菌生物膜

5.3实验结果与讨论

5.3.1 MTT法考察生物膜中死活细菌数结果

5.3.2死活染色法染色结果

5.3.3螺旋肽对生物膜反应器中生物膜作用结果

5.3.4小结

结论

参考文献

致谢

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摘要

细菌生物膜(biofilm)是由细菌分泌的胞外聚合物(EPS)并包裹细菌本身所形成的一种具有复杂结构的菌落群体。细菌形成生物膜后,对传统抗生素以及抗菌剂的耐药性大大增强,给人类的生活造成极大的安全隐患。金黄色葡萄球菌通过分泌胞外多糖、蛋白质、DNA等,形成能够抵抗外来抗菌剂的生物膜。目前主要靠抗生素去除金黄色葡萄球菌生物膜,但是抗生素的使用会使细菌产生耐药性,甚至导致“超级细菌”的产生。因此,亟待研发出一种高效低毒而且不产生耐药性的抗金黄色葡萄球菌生物膜的制剂。 本研究就以G(IIKK)3-4I-NH2为主要研究对象,考察该螺旋肽抗金黄色葡萄球菌生物膜的活性。同时,对G(IIKK)3I-NH2进行分子改造,增加其N端/C端氨基酸残基(GA(IIKK)3I-NH2、AA(IIKK)3I-NH2、(IIKK)3II-NH2)并考察其抗金黄色葡萄球菌的活性以及对正常细胞(NIH3T3和红细胞)的毒性。结果发现: (1)合成的螺旋肽均具有较好的抗金黄色葡萄球菌的能力,但G(IIKK)4I-NH2毒性较大,G(IIKK)3I-NH2和G(IIKK)4I-NH2的最低抑菌浓度MIC值分别为8μM和6μM。 (2)G(IIKK)3I-NH2和G(IIKK)4I-NH2具有良好的抑制金黃色葡萄球菌生物膜形成的能力,分别在最低抑菌浓度MIC和2MIC时基本能够抑制生物膜的形成。 (3)发现螺旋肽G(IIKK)3I-NH2通过和细菌结合抑制初始粘附进而抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成。 (4)G(IIKK)3I-NH2和G(IIKK)4I-NH2具有良好的破坏成熟金黄色葡萄球菌生物膜的性能,几乎能够完全破坏生物膜反应器中,在不同基质表面形成的金黄色葡萄球菌生物膜上层和内层细菌。 本项目研发了一类抗金黄色葡萄球菌抗生物膜的多肽,并研究了其抑制和破坏经黄色葡萄球菌生物膜机理,探讨了在医学中去除生物膜的应用,对进一步理解抗菌肽抗生物膜机理提供理论支持,同时为抗生物膜抗菌肽的设计提供新的设计思路。

著录项

  • 作者

    王芳;

  • 作者单位

    中国石油大学(华东);

  • 授予单位 中国石油大学(华东);
  • 学科 生物工程
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 陈翠霞,徐海,陈凯;
  • 年度 2017
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类
  • 关键词

    螺旋; 金黄色葡萄球菌;

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