针对EGFP的siRNA表达载体的构建、鉴定及哺乳动物细胞中NS5B的表达对RNAi效应的影响

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pSUPER siRNA表达载体是由RNA Polymerase Ⅲ类的H1启动子转录产生缺乏PolyA的小RNA，它有精确的转录起始位点和五个连续的胸腺嘧啶核苷酸(TTTTT)作为转录终止信号。以DNA为模板转录出的RNA先自身折叠形成小发夹状，在细胞内经加工后与化学合成的siRNA结构类似，能够发挥其抑制靶基因表达的作用。根据EGFP的编码区序列，设计模板寡核苷酸链，插入pSUPER载体中，构建针对EGFP mRNA的三种pSUPER siRNA表达载体，经酶切鉴定和DNA测序正确后，分别命名为pSUPER-R237、pSUPER-R304、pSUPER-R447。将构建的三种pSUPER siRNA表达载体pSUPER-R237、pSUPER-R304、pSUPER-R447分别与pIRES2-EGFP瞬时共转染COS-7细胞，通过荧光显微镜检测EGFP基因的表达变化情况。结果表明，针对EGFP编码区三个不同位点所构建的的pSUPER siRNA表达载体均可以明显抑制EGFP的表达。将含有羧基末端融合了EGFP的抗HBsAg单链抗体基因的载体pEGFP-N3-14S与pSUPER-R447瞬时共转染，观察pSUPER-R447对EGFP融合蛋白的抑制效率。结果显示，针对EGFP编码区的siRNA还可以抑制EGFP融合蛋白的表达。

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作者
马龙洋;
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作者单位

第四军医大学;

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授予单位第四军医大学;
学科生物化学与分子生物学
授予学位硕士
导师姓名杨安钢,王成济;
年度 2005
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类基因载体;转化及克隆;
关键词
RNA干扰; 绿色荧光蛋白; RNAi效应; siRNA表达载体;

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