特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响

梁华晟; 薛耀明; 钟宇华

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目的构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因(PTH1R)的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体以及鉴定及观测高糖下对INS-1细胞周期的影响.方法根据Genbank筛选PTH1R三个阳性克隆及一个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至INS-1细胞中,Westernblotting观察PTH1R表达,鉴定其转染效率,筛选出最佳抑制基因后,应用流式细胞仪检测25mmol/LD-葡萄糖处理INS-1细胞周期.结果菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确.并能成功转染到INS-1细胞株中,Westernblot筛选最佳抑制基因.细胞周期检测提示PTHIR沉默后抑制INS-1细胞从G0/G1期进入S期.结论成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,高糖状态下PTH1R表达可能为INS-1细胞自我保护的一种作用.

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来源
《南方医科大学学报》 |2010年第9期|2093-2096|共4页
作者
梁华晟; 薛耀明; 钟宇华;
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作者单位

广西医科大学第九附属医院内分泌科,广西,北海,536000;

南方医科大学南方医院内分泌科,广东,广州,510515;

广西医科大学第九附属医院内分泌科,广西,北海,536000;

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正文语种 chi
中图分类 R394.3;
关键词
甲状旁腺激素受体1基因; 小干扰RNA; 小发卡结构RNA; 转染; RNA干扰; 细胞周期;

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