多态性人细胞色素酶P450 2D6异源表达系统的建立及其在药物筛选中的初步应用

代理获取

页面导航

目录
摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

细胞色素P450同工酶属于血红蛋白超家族，是参与众多外源物和内源物生物转化反应的重要酶系，主要存在于肝脏中。其中CYP1、2、3家族负责大多数外源物的代谢，具有广泛的底物特异性。人CYP2D6参与代谢大量的处方药。药物遗传学研究表明，该酶基因的单核苷酸多态性(SNPs)可引起药物代谢的改变。本实验选取8个天然存在的SNPs，以研究单个氨基酸替换对CYP2D6生化性质和药物代谢的影响。选择适合酵母表达体系的载体pYES2/CT进行基因克隆，利用PCR定点突变方法在原型2D6基因中引入SNPs。测序后，用半乳糖诱导重组子在整合有POR基因的酵母系统中表达；用差速离心法制备含CYP2D6重组酶的S9微粒体。采用CYP2D6特异性荧光底物AMMC进行酶催化活性和动力学的实时检测，所得数据可用非线性回归分析法计算Km值和Vmax值；利用该系统还检测了5大类12种常用临床药物对CYP2D6原型及突变型的不同抑制常数。经Western Blot验证，半乳糖诱导的CYP2D6原型和8株SNPs在酵母系统均获得高表达。微粒体荧光检测结果显示， CYP2D6原型具有较强催化活性，Km值为2.9μmol/L，Vmax值为17.1RFU/min/mg微粒体蛋白。在8个SNP中，L213P和1369T完全失活，而P34S的活性显著降低，它的Km值是CYP2D6原型的3倍。A85V的活性略有增强，其Km值约为CYP2D6原型的一半。其余各株均保持与原型近似的Km值。药物抑制实验IC50值显示，CYP2D6原型和突变株都被其特异性抑制剂奎尼丁强烈抑制。尽管各类药物对CYP2D6原型和突变体蛋白的抑制趋势大体一致，但针对某一种药物的具体抑制情况，CYP2D6多念性现象依然存在；而且同类不同种药物对同一SNP的抑制程度也不一样。现已获得8种天然存在的单核苷酸多态性人CYP2D6酶，且它们的生化性质均已得到验证。这些突变株在酶动力学特征方面与野生型有明显的区别。已针对CYP2D6原型和突变型进行了12种药物的筛选，不同药物、不同SNP的抑制程度不同。多态性CYP2D6异源表达体系的建立，以及针对这些SNP所进行的药物筛选，将有助于新药研发和预防药物不良反应。

著录项

作者
王璐;
展开▼
作者单位

西北大学;

展开▼
授予单位西北大学;
学科分子微生物学
授予学位硕士
导师姓名陈超;
年度 2007
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类药物筛选和实验模型;
关键词
单核苷酸多态性; 药物代谢; 异源表达; 酶促动力学; 抑制实验; 药物筛选;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 药物代谢酶细胞色素P450 2D6的遗传多态性研究进展 [J] . 徐田雪 ,杨信怡 ,赵昆 . 中国抗生素杂志 . 2009,第007期
2. 限制性片段长度多态性聚合酶链反应法检测人细胞色素氧化酶2D6药物代谢相关基因位点多态性 [J] . 夏清荣 ,单锋 ,徐亚运 . 安徽医药 . 2019,第012期
3. 中国健康人群与精神分裂症患者细胞色素P450 2C19/P450 2D6遗传多态性的比较 [J] . 周健 ,康熙雄 ,吕红 . 首都医科大学学报 . 2007,第002期
4. 细胞色素P450酶2D6*10(CYP2D6*10)基因多态性对文拉法辛血药浓度的影响研究 [J] . 沈振华 ,王峰 ,张文娜 . 中国医疗设备 . 2016,第S1期
5. 细胞色素P450 2D6/C188T酶基因多态性与阿立哌唑治疗效应的关系 [J] . 张新建 ,关晓峰 ,张淼 . 哈尔滨医科大学学报 . 2007,第4期
6. 肝细胞色素P450酶系基因多态性对药物代谢功能影响的药物基因组学研究 [C] . 文思远 ,李健 ,王升启 . 第七届全国青年药学工作者最新科研成果交流会 . 2004
7. 人细胞色素P450氧化还原酶基因多态性对抗癌药物及环境毒物活化的影响研究 [A] . 李丹曦 . 2009

多态性人细胞色素酶P450 2D6异源表达系统的建立及其在药物筛选中的初步应用

目录

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅