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猫人参总皂苷对小鼠肝癌皮下移植瘤的抑制作用和对肝癌细胞周期的影响

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前言

第一部分：猫人参总皂苷对小鼠肝癌皮下移植瘤的抑制作用

材料方法

结果

讨论

第二部分：猫人参总皂苷对肝癌细胞周期的影响

材料方法

结果

讨论

附图

结论

参考文献

综述猫人参临床运用和实验室研究进展

在读期间发表论文参加科研工作情况说明

致谢

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摘要

一、研究背景: 肝癌严重威胁着人类的健康，2004年全世界约有61万人死于肝癌。中国是肝癌的高发地区。目前，手术治疗仍是其主要治疗手段，但是术后易复发、转移，以及较多肝癌病人确诊时已不具备手术指征等问题，使得单纯的手术治疗不能满足现阶段的肝癌治疗。中医药对肿瘤的治疗有着悠远的历史，独特的优势，并取得了显著的效果。中药有效成分的分离以及药理作用研究是目前研究中药治疗肿瘤的一个重要途径。 猫人参为江浙地区地方习用抗肿瘤药物，临床广泛运用于肺癌和消化道肿瘤的治疗。猫人参植物中含20种无机元素，根茎部位含有丰富的氨基酸，乙醇提取物含有儿茶类、三萜类等成分。近期研究表明，从猫人参中提取分离的蒽醌类复合物能够抑制小鼠肝癌皮下移植瘤的生长。本课题在前期相关工作的基础上，进一步观察猫人参总皂苷对肝癌体内体外生长的抑制作用，初步探讨其作用机制。 二、研究目的: (一)观察猫人参总皂苷对小鼠肝癌皮下移植瘤的抑制作用。 (二)观察猫人参总皂苷对肝癌细胞周期的影响。 三、研究方法: 第一部分：猫人参总皂苷对肝癌体内生长抑制作用的实验研究 1、建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型，随机分组，规律给药。称取各组小鼠实验前后体质量，测量瘤体体积，称取瘤质量。 2、肿瘤组织免疫组化染色，运用IMS医学图象定量分析软件检测肿瘤组织TUNEL的表达情况。 第二部分：猫人参总皂苷对肝癌细胞体外作用的实验研究 1、四氮唑盐还原法(MTT法)和台盼蓝染色细胞计数法检测不同浓度猫人参总皂苷作用48h对人肝癌细胞BEL-7402和小鼠肝癌细胞H22，细胞的增殖抑制率。 2、流式细胞仪(FCM)采用PI染色方法检测不同浓度猫人参总皂苷作用48h对人肝癌细胞BEL-7402，小鼠肝癌细胞H22细胞周期的影响。 3、采用Western blot方法检测猫人参总皂苷作用48h对人肝癌细胞BEL-7402细胞周期相关蛋白以及激酶的变化。 四、研究结果: 第一部分：猫人参总皂苷对肝癌体内生长抑制作用的实验研究 1、各组之间小鼠体质量无明显差异；高、低剂量给药组瘤体体积和瘤质量均明显低于阴性对照组，有显著统计学差异(P＜0.05)；高、低剂量给药组的抑瘤率分别为53.2％和43.5％。 2、给药组TUNEL阳性表达率高于阴性对照组(P＜0.05)。 第二部分：猫人参总皂苷对肝癌细胞体外作用的实验研究 1、猫人参总皂苷浓度在0.75-3 mg/ml时对人肝癌细胞BEL-7402和小鼠肝癌细胞H22具有细胞毒作用。 2、猫人参总皂苷作用于人肝癌BEL-7402细胞，在给药浓度0.1 mg/ml，0.2 mg/ml和0.4 mg/ml时随浓度增加S期的比例明显增加，其他两期比例减少；猫人参总皂苷作用于小鼠肝癌细胞H22在给药浓度为0.1 mg/ml，0.2 mg/ml和0.4 mg/ml时随浓度增加G0/G1期和G2/M期的比例明显增加，S期比例减少。3、猫人参总皂苷根据给药浓度的增加人肝癌BEL-7402细胞周期相关蛋白Cyclin A的表达上调；Cdk2无明显变化。 五、研究结论: (一)猫人参总皂苷能够抑制小鼠肝癌皮下移植瘤的生长，其作用机制之一可能是诱导移植瘤细胞凋亡。 (二)猫人参总皂苷在浓度为0.75-3 mg/ml时通过细胞毒作用抑制人肝癌细胞BEL-7402和小鼠肝癌细胞H22的增殖，在浓度低于0.75 mg/ml时可将细胞BEL-7402和H22周期分别阻滞在S期和G0/G1，G2/M期，其对BEL-7402细胞周期阻滞的作用机制可能和Cyclin A的上调有关。

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