构建假单胞菌突变株M18GQ携带重组质粒pME6032Phz的工程菌株及响应面法优化吩嗪-1-羧酸发酵条件的研究

摘要

ABSTRACT

第一章 绪论

1.1 假单胞菌的生防机制

1.1.1 植物根际促生细菌

1.1.2 假单胞菌的生防作用机制

1.1.3 假单胞菌M18 在生物防治方面的研究及应用

1.2 吩嗪-1-羧酸的生物合成与调控

1.2.1 吩嗪的生物合成途径

1.2.2 吩嗪生物合成调控的影响因素

1.2.3 假单胞菌M18 基因工程菌的研究

1.3 商业化农用抗生素的发展

1.3.1 菌株的筛选与改良

1.3.2 发酵培养基的优化

1.3.3 发酵过程中的重要影响因素

1.4 本课题研究目的、内容及意义

第二章 吩嗪基因簇表达质粒PME6032PHZ 的构建及其对M18 野生型和突变株PCA 产量的影响 24?

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.2.1 菌株、质粒及引物

2.2.2 PCR 的引物及反应条件

2.2.3 DNA 提取，胶回收，质粒抽提，酶切和酶连

2.2.4 培养基

2.2.5 培养条件

2.2.6 生长曲线测定

2.2.7 PCA 定量分析

2.2.8 试剂（盒）、仪器与设备

2.3 结果与分析

2.3.1 phz 合成基因簇的PCR 扩增

2.3.2 重组质粒pME6032Phz 的构建和验证

2.3.3 pME6032Phz 对M18 野生型及其突变株M18G、M18Q 和M18GQ PCA 产量的影响

2.3.4 重组质粒pME6032Phz 对M18GQ 生长的影响

2.4 本章小结

第三章 PCA 高产工程菌株M18GQ/PME6032PHZ 培养条件的初筛和诱导条件的优化

3.1 引言

3.2 材料与方法

3.2.1 菌株

3.2.2 培养基

3.2.3 培养方法

3.2.4 M18GQ/pME6032Phz 菌株培养条件和培养基成分的单因子筛选

3.2.5 M18GQ/pME6032Phz 菌株诱导条件的优化

3.2.6 PCA 定量分析

3.2.7 仪器与设备

3.3 结果与分析

3.3.1 装液量和培养基浓度对PCA 产量的影响

3.3.2 培养基起始pH 值对PCA 产量的影响

3.3.3 无机盐对PCA 产量的影响

3.3.4 I PTG 诱导的最优浓度

3.3.5 IPTG 开始诱导的最优时间

3.4 本章小结

第四章 响应面方法优化M18GQ/PME6032PHZ 菌株发酵培养基

4.1 引言

4.2 材料与方法

4.2.1 菌株

4.2.2 培养基

4.2.3 培养方法

4.2.4 M18GQ/pME6032Phz 菌株发酵培养基响应面优化方法

4.2.5 PCA 定量分析

4.2.6 仪器与设备

4.3 结果与分析

4.3.1 部分因子设计筛选影响产PCA 的重要因素

4.3.2 最陡爬坡实验

4.3.3 中心组合设计和响应面分析

4.3.4 模型验证

4.4 本章小结

第五章 结论和展望

5.1 主要结论

5.2 研究展望

5.3 创新点

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间已发表或录用的论文