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浓香型白酒糟醅中芽孢杆菌属细菌的分类鉴定和16S rDNA序列系统发育分析

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摘要

文献综述

1芽孢杆菌分类的历史

2芽孢杆菌的分类现状

2.1现有芽孢杆菌属概况

2.2芽孢杆菌属

2.3芽孢杆菌分类方法由传统分类向多相分类演变

3芽孢杆菌的系统发育

4芽孢杆菌分类鉴定研究概况

5芽孢杆菌分类鉴定的方法

5.1分类鉴定特征的选择

5.2表型的方法

5.3遗传学方法

6芽孢杆菌的资源发掘与实际应用

6.1在植物病虫害生物防治中的应用

6.2在农业生产中的应用

6.3在食品加工和保鲜中的应用

6.4在工业生产中的应用

6.5在科学研究中的应用

6.6在医学方面的应用

6.7在环保中的应用

参考文献

前言

第一章菌株的分离纯化和分类

1实验材料

1.1菌株来源

1.2主要培养基

1.3主要生理生化实验试剂

2实验方法

2.1菌株的分离纯化和保存

2.2菌株形态特征的观察

2.3菌株主要生理生化特征的测定

3结果与讨论

3.1芽孢杆菌的来源

3.2芽孢杆菌的分离

3.3菌株类群的划分

第二章浓香型白酒糟醅中芽孢杆菌属细菌16S rDNA的系统发育分析

1材料与设备

1.1分析材料

1.2主要设备与试剂

2实验方法

2.1芽孢杆菌基因组DNA的提取

2.2 16S rDNA片段的PCR扩增及纯化

2.3 PCR产物的克隆

2.4 16S rDNA片段的序列测定

2.5 16S rDNA序列的系统发育分析

3结果与讨论

3.1总DNA的提取

3.2 16S rDNA片段的PCR扩增及纯化

3.3 PCR产物的克隆

3.4序列分析

参考文献

致谢

科研成果简介

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摘要

白酒的生产以泥窖窖池为基础,窖池中的多种微生物,特别是栖息于酒醅中的微生物左右着酒的产量和品质。细菌是窖池发酵三大菌群之一,浓香型白酒浓郁的香气主要来源于发酵中后期的酯化增香期,而芽孢杆菌在这个时期大量增殖,成为酒醅的主要优势菌群。 本研究的酒醅样品取四川某国家名酒厂市内老酒坊窖池,双轮底生产工艺,发酵正常;分析样品为窖池中心糟醅(窖项以下150-175cm,中心75cm以内)样品,每次取3点混合均匀作为一个分析样品,取样时间为入窖发酵、发酵一周、发酵四周、发酵七周、发酵十周,共5次。首先采用常规的鉴定方法对分离到的菌株进行鉴定,并把分离到的菌株划分类群;最后,采用16S rDNA序列分析方法,验证常规鉴定结果的准确性,并对各类群的代表菌株进行系统发育分析。系统发育分析的流程如下:提取用常规方法鉴定后各类群代表的菌株基因组DNA,利用基因组DNA为模板扩增16S rDNA,并通过分子克隆等过程测定各类群的代表菌株16S rDNA全序列,最后对测得的序列进行Blast分析,并构建系统发育树。 首先通过细菌形态学特征的观察,检出芽孢杆菌属细菌69株,然后参考生理生化实验分析,将69株菌划分为五大类群。再经16S rDNA序列分析方法分析,确定样品中芽孢杆菌属细菌有地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)和蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),其中芽孢杆菌其中以地衣芽孢杆菌(30.43%)和解淀粉芽孢杆菌(27.53%)为主,但优势种群不太明显。最后系统发育分析表明,环状芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌进化上的亲缘关系相对较近,而其他芽孢杆菌在进化上分为不同的支系,相互之间的亲缘关系相对较远,整体来说窖池酒醅中的芽孢杆菌属细菌有着较高的遗传多样性。

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