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饲粮蛋白来源对早期断奶仔猪生产性能和免疫功能的影响

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前言

1.文献综述

1.1 早期断奶对仔猪免疫系统的影响

1.2 蛋白质饲料来源

1.2.2 血浆蛋白粉

1.2.3 大豆浓缩蛋白

1.2.4 乳清浓缩蛋白

1.2.5 鸡蛋粉

1.3 猪瘟

1.4 营养对猪瘟疫苗效果的影响

2.本研究的目的和意义

3.试验技术路线

4.材料与方法

4.1 试验设计

4.2 疫苗

4.3 试验动物选择及分组

4.4 试验日粮

4.5 饲养管理

4.6 血样采集和屠宰取样

4.6.1 血样采集

4.6.2 屠宰取样

4.7 主要仪器和试剂

4.7.1 主要仪器

4.7.2 试剂及试剂盒

4.7.3 常用试剂的配制

4.8 测定指标及方法

4.8.1 仔猪生产性能

4.8.2 仔猪腹泻情况

4.8.3 仔猪肠道形态

4.8.4 血清激素(IGF-Ⅰ、皮质醇)测定

4.8.5 内脏器官相对重量

4.8.6 血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)及补体(C3、C4)测定

4.8.7 血清猪瘟抗体检测

4.8.8 血清免疫细胞因子(IL-1β、IL-10、IFN-γ)测定

4.8.9 脾脏TLR3、TLR7、TLR9表达量的测定

4.9 数据处理

5.结果与分析

5.1 饲粮蛋白来源对断奶仔猪生产性能的影响

5.2 饲粮蛋白来源对断奶仔猪腹泻情况的影响

5.3 饲粮蛋白来源对断奶仔猪肠道形态的影响

5.4 饲粮蛋白来源对断奶仔猪血清IGF-Ⅰ和皮质醇的影响

5.5 饲粮蛋白来源对断奶仔猪器官指数的影响

5.6 饲粮蛋白来源对断奶仔猪血清免疫球蛋白及补体的影响.

5.7 饲粮蛋白来源对接种猪瘟弱毒苗仔猪血清猪瘟抗体的影响.

5.8 饲粮蛋白来源对仔猪血清细胞因子的影响

5.9 饲粮蛋白来源对接种猪瘟弱毒苗仔猪脾脏TLRs(3、7、9)mRNA表达的影响

5.9.1 脾脏中β-actin内参基因的Real Time PCR

5.9.2 脾脏中TLR3基因的Real Time PCR

5.9.3 脾脏中TLR7基因的Real Time PCR

5.9.4 脾脏中TLR9基因的Real Time PCR

6.讨论

6.1 饲粮蛋白源对仔猪生产性能的影响

6.2 饲粮蛋白源对仔猪肠道形态和腹泻的影响

6.3 饲粮蛋白源对仔猪血清激素的影响

6.4 饲粮蛋白源对仔猪器官指数的影响

6.5 饲粮蛋白源对仔猪细胞免疫的影响

6.6 饲粮蛋白源对仔猪脾脏病原式识别受体mRNA表达的影响

6.7 饲粮蛋白源对仔猪体液免疫的影响

6.7.1 饲粮蛋白源对仔猪血清免疫球蛋白和补体的影响

6.7.2 饲粮蛋白源对仔猪血清猪瘟抗体滴度的影响

结论

参考文献

致谢

研究生期间发表的文章

附录一:猪血清免疫球蛋白和补体浓度透射免疫比浊法检测

附录二:血清激素浓度ELISA检测

附录三:血清IFN-y(IL-1β、IL-30)浓度ELISA检测

附录四:血清猪瘟间接血凝操作方法

附录五:脾脏TLR3、TLR7、TLR9mRNA表达量测定

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摘要

本试验研究饲粮不同蛋白来源对早期断奶仔猪生产性能和免疫功能的影响。选用日龄(22±1d)、体重(7.00±0.1gkg)相近的“杜长大”三元杂交断奶仔猪320头,按试验要求随机分为4组,每组5个重复,每个重复16头猪。仔猪断奶前2d接种猪瘟弱毒苗,断奶后10d内分别饲喂不同蛋白来源(即血浆蛋白粉、大豆浓缩蛋白、乳清浓缩蛋白和鸡蛋粉组)的饲粮,11~32d各组更换为同一饲粮。统计仔猪断奶后10d、11~32d及全期采食量、日增重、料重比、腹泻率和腹泻指数。断奶后10d每组屠宰4头仔猪收集小肠和脾脏,检测小肠形态学,利用RT-PCR检测脾脏Toll样受体3(Toll-likereceptor3,TLR3)、Toll样受体7(Toll-like receptor7,TLR7)和Toll样受体9(Toll-like receptor9,TLR9)mRNA相对表达量。收集断奶前2d、断奶后5d、10d、32d血清,透射免疫比浊法测定血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度;ELISA法测定血清激素(IGF-Ⅰ、皮质醇)和细胞因子(IFN-γ、IL-iβ、IL-10)的浓度;正相间接血凝试验检测血清猪瘟抗体效价。
   结果表明:
   1、断奶后10d,血浆蛋白粉组仔猪日增重分别比大豆浓缩蛋白、乳清浓缩蛋白和鸡蛋粉组提高了6.44%(P<0.05)、5.47%和5.71%,料肉比分别比大豆浓缩蛋白、鸡蛋粉组降低了16.67%(P<0.01)、14.11%(P<0.05),小肠绒毛高度显著高于大豆浓缩蛋白组(P<0.05),血浆蛋白粉组第5d、10d皮质醇浓度显著低于大豆浓缩蛋白组(P<0.05),各组IGF-Ⅰ浓度无显著差异(P>0.05);断奶后10d各组间腹泻指数和腹泻率差异不显著(P>0.05)。保育期(11-32d),与其它三组比较,大豆浓缩蛋白组日增重和料肉比有增加趋势,腹泻有降低趋势。
   2、血浆蛋白粉组仔猪胃指数显著大于大豆浓缩蛋白组(P<0.05),各组间肝脏、肾脏、胰脏指数无显著差异(P>0.05)。大豆浓缩蛋白组脾脏指数比血浆蛋白粉、乳清浓缩蛋白、鸡蛋粉组分别高出17.22%、13.33%、8.21%(P>0.05)。血浆蛋白粉组IgG、IgA、补体C3与大豆浓缩蛋白组差异显著(P<0.05),鸡蛋粉组第5d、10dIgA和第10d补体C3显著高于大豆浓缩蛋白组(P<0.05)。
   3、试验第5d,血浆蛋白粉、乳清浓缩蛋白组仔猪血清IFN-γ水平显著高于鸡蛋粉组(P<0.05);大豆浓缩蛋白组IL-10显著高于血浆蛋白粉、乳清浓缩蛋白组(P<0.05)和鸡蛋粉组(P<0.01)。试验第10d,血浆蛋白粉组IFN-γ极显著高于乳清浓缩蛋白组(P<0.01),显著高于大豆浓缩蛋白组(P<0.05)。试验32d,大豆浓缩蛋白组IL-10极显著高于鸡蛋粉组(P<0.01),显著高于乳清浓缩蛋白组(P<0.05)。
   4、试验第10d,各组仔猪脾脏TLR3、TLR7、TLR9mRNA表达量无显著差异(P>0.05);血浆蛋白粉组TLR3 mRNA表达量有提高趋势;血浆蛋白粉组脾脏中TLR9mRNA比乳清浓缩蛋白组提高了61.11%(P=0.084)。
   5、试验第5d,血浆蛋白粉组猪瘟抗体效价显著高于大豆浓缩蛋白组(P<0.05);试验第10d,血浆蛋白粉、乳清浓缩蛋白、鸡蛋粉组猪瘟抗体效价分别比大豆浓缩蛋白组高出13.33%(P=0.097)、6.23%、3.33%;试验32d,血浆蛋白粉组仔猪猪瘟保护率达100%。
   结论:
   1、仔猪断奶后10d,血浆蛋白粉组可显著改善生产性能;试验全期,大豆浓缩蛋白是较优质蛋白源。
   2、仔猪断奶后10d,血浆蛋白粉组的饲喂效果优于大豆浓缩蛋白组,其机理在于血浆蛋白粉组可改善仔猪肠粘膜形态、降低血清皮质醇浓度,提高血清IgG、IgA、C3水平,从而减缓应激和提高机体体液免疫。
   3、血浆蛋白粉组有利于仔猪母源抗体的维持和自身猪瘟抗体生成,增强疫苗的免疫保护效应,其机理在于血浆蛋白粉组可激活补体C3,提高血清IFN-γ,上调脾脏TLR3、TLR9mRNA表达。

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