猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法的建立及乙脑病毒四川分离株PrM/E基因的序列分析

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缩略词表

文献综述

1 JEV的病原学特性

1.1 JEV的理化特性

1.2 JEV的培养特性

1.3 JEV的血凝性

2 JEV的分子生物学特性

2.1 JEV的基因组及编码蛋白

2.2 结构蛋白

2.3 非结构蛋白

3 JEV的诊断方法

3.1 JEV的分离鉴定

3.2 JEV的血清学诊断方法

3.3 JEV的分子生物学诊断方法

4 新型疫苗的研究

5 本研究的目的与意义

5.1 猪JEV RT-PCR检测方法的建立

5.2 JEV四川分离株PrM/E基因的序列分析

第一章 猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法的建立

1 材料

1.1 毒株和细胞

1.2 试剂

1.3 实验仪器

2 方法

2.1 JEV引物设计

2.2 JEV病毒的增殖

2.3 JEV核酸提取

2.4 JEV CDNA的合成

2.5 JEV RT-PCR的扩增

2.6 JEV RT-PCR条件的优化

2.7 RT-PCR特异性试验

2.8 RT-PCR敏感性试验

2.9 临床样品的检测

3 结果

3.1 JEV RT-PCR扩增结果

3.2 RT-PCR扩增优化结果

3.3 RT-PCR特异性结果

3.4 RT-PCR敏感眭结果

3.5 临床检测结果

4 讨论

4.1 扩增基因的选择

4.2 PCR的循环次数

4.3 JEV RT-PCR检测的敏感性

4.4 JEV RNA提取

第二章 JEV分离株CZ1、NJ1的PrM/E基因的克隆和序列分析

1 材料

1.1 生物材料

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2 方法

2.1 引物设计

2.2 JEV核酸的提取及cDNA合成

2.3 JEV PrM/E基因的扩增

2.4 PCR产物的回收与纯化

2.5 JEV PrM/E基因的克隆

2.6 阳性菌落的筛选与鉴定

3 结果

3.1 PrM/E基因的扩增结果

3.2 重组质粒pMD19-T-PrM/E的鉴定

3.3 PrM/E基因的序列测定

3.4 新分离病毒E基因的相似性分析

3.5 E蛋白活性结构域氨基酸分析

3.6 四川省新分离2株JEV的基因分型

4 讨论

4.1 四川乙脑分离株遗传进化的特征

4.2 乙脑活载体疫苗研制中保护性基因的选择

4.3 乙脑病毒E蛋白相似性及活性结构域分析

结论

参考文献

附录

致谢