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冷冻稀释液中添加抗氧化剂对猪精液冷冻保存效果的影响

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论文说明:符号说明

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1前言

1.1哺乳动物精液冷冻保存研究概况

1.2猪精液冷冻的研究历史和现状

1.2.1猪精液冷冻研究简史

1.2.2猪精液冷冻研究现状

1.3猪精液冷冻损伤机理

1.3.1精液冷冻基本原理

1.3.2猪精液冷冻特点

1.4猪精液冷冻稀释液中的添加剂

1.5精子质量检测

1.5.1精子活力

1.5.2精子活率

1.5.3精子质膜完整性

1.5.4精子顶体完整性

1.6本试验目的与意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1试验动物

2.1.2主要药品及试剂

2.1.3主要仪器设备及耗材

2.1.4部分溶液的配制

2.2试验方法

2.2.1猪精液冷冻程序

2.2.2精液品质检查

2.2.3精子和精浆中抗氧化酶及MDA的测定

2.3试验设计

2.3.1冷冻过程中猪精子质量、抗氧化酶活性、MDA含量变化

2.3.2冷冻稀释液中添加抗氧化剂的冷冻保存效果

2.4数据处理

3结果与分析

3.1猪精液冷冻过程中精子质量、抗氧化酶活性及MDA含量变化

3.1.1猪精液冷冻过程中精子质量变化

3.1.2猪新鲜精液中的抗氧化酶检测结果

3.1.3猪精子冷冻处理过程中SOD、GPX活性变化

3.1.4猪精液冷冻过程中精子MDA含量变化

3.2猪精液中MDA含量与SOD、GPX活性及精子质量间的相关性分析

3.2.1猪精子中MDA含量与SOD、GPX活性相关性分析

3.2.2猪精子中MDA含量和精子质量相关性分析

3.3冷冻稀释液中添加抗氧化剂对猪精子质量及MDA含量的影响

3.3.1 VC、VE对猪精子质量及MDA含量的影响

3.3.2 SOD、CAT对猪精子质量及MDA含量的影响

3.3.3 GSH对猪精子质量及MDA含量的影响

3.4精子冷冻前后超微结构变化

4讨论

4.1猪精液冷冻保存与氧化损伤

4.2精液冷冻稀释液中添加抗氧化剂对猪精子质量的影响

4.2.1添加VC、VE对猪精子质量的影响

4.2.2添加SOD、CAT、GSH对猪精子质量的影响

4.3添加抗氧化剂对猪精子脂质过氧化的影响

4.4冷冻及冷冻稀释液中添加抗氧化剂对猪精子超微结构的影响

5结论

参考文献

致谢

图版及说明

附录

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摘要

本文为了提高猪精液冷冻技术,探索抗氧化剂在猪精液冷冻保存中的作用效果,采集长白猪精液,检测新鲜精子和精浆中的抗氧化酶SOD、GPX、GR、CAT活性及冷冻.解冻过程中精子抗氧化酶的变化,揭示抗氧化酶的变化规律;并在LEY冷冻稀释液的基础上分别添加V<,C>、V<,E>、SOD、CAT、GSH等抗氧化剂,检测平衡后和解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率、超微结构以及精子脂质过氧化产物MDA含量等,评价猪精液冷冻效果,揭示猪精液冷冻过程中精子质量、精子脂质过氧化变化及其相关性,从而筛选出具有提高猪冷冻精液品质的的抗氧化剂。试验结果如下: 猪精液平衡后和解冻后精子的活力、活率、质膜完整率低于鲜精,差异极显著(P<0.01)。新鲜猪精子和精浆中SOD活性较高、GPX、GR活性较低,没有检测到CAT;解冻后精子中SOD、GPX活性降低,SOD活性与鲜精相比差异极显著(P<0.01),GPX差异不显著(P>0.05)。解冻后精子中MDA含量高于鲜精和平衡后精子,差异极显著(P<0.01)。精子中MDA含量与SOD、GPX活性、质膜完整率和顶体完整率呈负相关,但差异不显著(P>0.05),与活力和活率呈负相关,差异极显著(P<0.01);MDA可以作为评价精子冷冻效果的一个指标。在LEY冷冻稀释液的基础上,单独添加10mmol/ml V<,C>和0.2mg/ml V<,E>,能够改善精子的活力、活率和质膜完整率(P<0.05),V<,E>浓度大于等于0.5mg/ml时,冷冻-解冻后精子质量开始下降;联合添加此浓度V<,C>和V<,E>时并不能进一步改善冷冻-解冻后精子质量。冷冻稀释液中添加SOD、CAT可以提高平衡后和冷冻.解冻后活力、活率、质膜完整率和顶体完整率,其中以100U/ml SOD、200U/ml CAT时效果最明显(P<0.01)。联合添加此浓度SOD和CAT时效果更明显(P<0.01);猪冷冻稀释液中添加GSH,冷冻.解冻后猪精子质量没有明显变化。本试验首次电镜观察了猪冷冻稀释液中添加抗氧化剂对精子超微结构的影响,联合添加SOD和CAT冷冻-解冻后精子的超微结构与无抗氧化剂组相比得到改善。 由上可知,在猪精液冷冻稀释液中,单独添加10mmol/ml V<,C>、0.2mg/ml V<,E>、100U/ml SOD、200U/ml CAT或联合添加SOD、CAT,可以减少猪精子冷冻过程中的氧化损伤,提高猪冷冻精液的品质,为抗氧化剂在猪精液冷冻中的应用提供一定的参考。

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