引言
1.1泡沫病毒的结构
1.1.1病毒颗粒的超微结构
1.1.2病毒基因组的结构
1.2泡沫病毒的结构蛋白
1.2.1 Gag
1.2.2 Pol
1.2.3 Env
1.3泡沫病毒的非结构蛋白与基因表达调节
1.3.1灵长类泡沫病毒反式激活因子(Tas)的结构和功能
1.3.2泡沫病毒LTR起始的基因转录及其调节
1.3.3泡沫病毒的内部启动子及其活性调节
1.3.4泡沫病毒基因表达调控的时序模式
1.3.5 Bet、Env-Bet及其他非结构蛋白
1.4泡沫病毒的复制
1.4.1泡沫病毒复制的特点
1.4.2泡沫病毒的受体及细胞嗜性
1.5泡沫病毒的非致病性与泡沫病毒载体
1.5.1泡沫病毒的非致病性
1.5.2泡沫病毒载体
1.6本研究的前期基础
1.6.1 BFV LTR的结构特点和转录调节
1.6.2 BFV IP的结构与功能
1.6.3 BFV基因组3'端非结构蛋白编码区的结构
1.6.4 BFV的结构蛋白及表达
1.7本研究的目的和意义
材料与方法
2.1实验材料
2.1.1病毒
2.1.2细胞
2.1.3菌株
2.1.4质粒
2.1.5探针
2.1.6主要试剂
2.2实验方法
2.2.1细胞与病毒的培养
2.2.2病毒cDNA(Hirt DNA)的提取
2.2.3聚合酶链式反应
2.2.4质粒构建
2.2.5报道基因的瞬时表达分析
2.2.6序列分析
2.2.7重组蛋白的表达和纯化
2.2.8电泳迁移率变动分析
2.2.9 DNase I足迹实验
2.3技术路线
结果及分析
3.1 BFV LTR的缺失分析及TRE Ⅱ的界定
3.1.1 BFV LTR缺失型报道质粒的构建
3.1.2 BFV LTR缺失型报道质粒的瞬时表达分析
3.1.3 BFV TREⅡ的界定
3.2 BFV IP的缺失分析及TREIP的界定
3.2.1 BFV IP缺失型报道质粒的构建
3.2.2 BFV IP缺失型报道质粒的瞬时表达分析
3.2.3 BFV TREIP的界定
3.3 BFV Tas重组蛋白的表达纯化及活性测定
3.3.1 Borf-1原核表达质粒的构建
3.3.2重组Borf-1蛋白的表达纯化和活性测定
3.4 BFV Tas蛋白与TRE Ⅱ的相互作用
3.4.1 BFV TRE Ⅱ和TRE IP探针的合成与标记
3.4.2 Borf-1蛋白与BFV TRE Ⅱ的特异性结合
3.4.3 BFV TREⅡ中Borf-1蛋白结合位点的分析
3.4.4缺失型Tas蛋白与TREⅡ结合活性的分析
3.5 BFV Tas蛋白与TRE IP的相互作用
3.5.1 Borf-1蛋白与TRE IP的特异性结合
3.5.2 TREIP中Tas蛋白结合位点的分析
3.5.3缺失型Tas蛋白与TREIP结合活性的比较
讨论
4.1 Borf-1蛋白与TRE相互作用的方式及特点
4.1.1 BFV编码序列特异性DNA结合蛋白
4.1.2 Borf-1与TRE相互作用的特点
4.2 Borf-1蛋白激活BFV基因转录机理的初步探讨
4.2.1 TRE Ⅱ和TRE IP结构与功能的比较
4.2.2 Borf-1与TRE的结合是激活转录的前提条件
4.2.3宿主细胞因子可能参与激活过程
4.3时序模式——Tas控制下的基因差异性表达
4.3.1 BFV的基因表达受LTR及IP的双重调节
4.3.2 Borf-1通过不同方式调节LTR和IP的活性
结论
参考文献
附录
后记
