荷卵巢癌裸鼠E-钙粘素启动子去甲基化的研究

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目的:
　　观察DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)联合组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂苯丁酸钠(Sodium 4-Phenylbutyrate,SPB)对荷卵巢癌细胞系SKOV3裸鼠的抗肿瘤增殖作用及其与上皮性钙黏素(epithelial cadherin,E-cad)表达变化的关系。
　　方法:
　　 1.用人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3建立卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型,成瘤后随机分为4组:对照组、5-Aza-CdR组、SPB组和5-Aza-CdR+SPB组。
　　 2.观察5-Aza-CdR,SPB以及5-Aza-CdR+SPB对裸鼠腹腔移植瘤的抑制作用及对裸鼠的副作用。
　　 3.免疫组化法检测腹腔移植瘤中DNMT1、HDAC1以及E-cad的表达变化情况。
　　 4.应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测各组移植瘤E-cad基因启动子区5’CpG岛甲基化状况,以凝胶成像系统对结果进行分析。
　　 5.RT-PCR法检测各组移植瘤E-cadmRNA的表达变化情况。
　　 6.Western印迹方法检测各组移植瘤E-cad蛋白的表达变化情况。
　　结果:
　　 1.比较4组裸鼠在治疗前后的体重变化,发现对照组裸鼠体重有所减轻,与治疗组相比无统计学差异(P>0.05)；各组裸鼠体重在治疗前后均无统计学差异(P>0.05)。
　　 2.与对照组相比,治疗组中裸鼠腹围增长量较小,腹水量较少,差异显著(P<0.05),而与单用药组相比,联合组裸鼠腹围增长量较小,腹水量较少,差异显著(P<0.05),两组单用药组之间腹水量无统计学差异(P>0.05)。
　　 3.与对照组相比,治疗组裸鼠瘤重明显减轻,差异显著(P<0.05),与单用药组相比,联合组瘤重明显较轻,差异显著,(P<0.05)；而单用药组间瘤重无统计学差异(P>0.05)。联合组比单用药组裸鼠腹腔移植瘤抑瘤率高,差异显著(P<0.05)。
　　 4.与对照组相比,各治疗组腹腔肿瘤负荷分级要低,差异显著(P<0.05),而联合组与单用药组相比,联合组腹腔肿瘤负荷分级要低,差异显著(P<0.05),两单用药组之间无统计学差异(P>0.05)。
　　 5.与对照组相比,治疗组中肝转移减少,差异显著(P<0.05),而各给药组间肝转移无统计学差异(P>0.05),肺、肾、胰、脾转移情况各组间无统计学差异(P>0.05)6.在移植瘤组织中,DNMT1和HDAC1呈高表达,5-Aza-CdR能抑制DNMT1的表达,SPB能抑制HDAC1的表达,与对照组相比,差异显著(P<0.05),联合应用5-Aza-CdR和SPS对DNMT1和HDAC1的抑制未见协同作用。
　　 7.MSP检测发现对照组、SPB组移植瘤中E-cad基因高甲基化,5-Aza-CdR能够诱导甲基化的E-cad基因去甲基化,联合应用5-Aza-CdR和SPB可更大程度上诱导甲基化的E-cad基因去甲基化。
　　 8.RT-PCR检测发现对照组、SPB组移植瘤中甲基化的E-cad基因表达缺失或者下调,而经过5-Aza-CdR治疗后,mRNA恢复表达或者表达增强。联合应用5-Aza-CdR和SPS可更大程度上恢复mRNA的表达。
　　 9.免疫组化和Western-blotting检测发现对照组、SPB组移植瘤中甲基化的E-cad蛋白表达缺失或者下调,而经过5-Aza-CdR治疗后,E-cad蛋白恢复表达或者表达增强。联合应用5-Aza-CdR和SPB可更大程度上恢复E-cad蛋白的表达。
　　结论:
　　 1.5-Aza-CdR和SPB对荷卵巢癌细胞系SKOV3裸鼠都有抑制增值和诱导凋亡作用,而联合用药组抑制增殖和诱导凋亡作用明显增强；联合用药组比单用药组裸鼠腹腔移植瘤抑瘤率高。
　　 2.5-Aza-CdR和SPB都无明显的毒副作用,联合用药组也未发现明显的毒副作用3.5-Aza-CdR能够降低E-cad基因启动子区的甲基化,可恢复其表达；联合应用5-Aza-CdR和SPB可产生协同效应,显著增强甲基化的E-cad基因的表达,降低细胞侵袭、转移力,对于卵巢癌的治疗有着重要的作用。

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作者
钱林华;
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作者单位

天津医科大学;

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授予单位天津医科大学;
学科妇产科学
授予学位硕士
导师姓名曲芃芃;
年度 2010
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类卵巢肿瘤;免疫疗法;
关键词
卵巢癌; E-钙粘素; 5-氮杂脱氧胞苷; 苯丁酸钠; 去甲基化; 抗肿瘤作用;

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