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脱氯酶负载碳纳米管修饰电极上二氯甲烷电生物脱氯反应的研究

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摘 要

ABSTRACT

1 绪论

1.1 氯代有机物(COCs)的来源与危害

1.2 COCs脱氯技术

1.2.1 催化加氢脱氯

1.2.2 电化学脱氯

1.2.3 生物脱氯

1.2.4 电生物脱氯

1.3 研究目的和意义

1.4 研究内容

1.5 研究路线

2 DCM脱氯酶基因的克隆与重组菌的构建

2.1 实验材料

2.1.1 实验药品

2.1.2实验仪器

2.1.3菌种、质粒及培养基

2.2实验方法

2.2.1 M. rhodesianum H13的培养与全基因组的提取

2.2.2 PCR扩增目的片段并回收扩增产物

2.2.3 重组质粒的构建与转化

2.2.4 重组质粒的鉴定

2.2.5 重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞

2.3 结果与讨论

2.3.1 提取的细菌基因组浓度

2.3.2 PCR扩增dcm基因

2.3.3 重组质粒的构建与鉴定

2.3.4目的基因的鉴定

2.4小结

3.1 材料与方法

3.1.1 分析方法

3.1.2 序列来源

3.2 结果与讨论

3.2.1 DCM脱氯酶理化性质分析与亲疏水性预测

3.2.2 DCM脱氯酶信号肽、跨膜结构和亚细胞定位的预测

3.2.3 DCM脱氯酶二级结构、磷酸化位点和功能域分析

3.2.4 DCM脱氯酶三级结构预测与催化通道分析

3.2.5遗传进化树构建与序列同源性分析

3.3 小结

4.1实验材料

4.1.1实验药品

4.1.2实验仪器

4.1.3菌种及试剂的配制

4.2 实验方法

4.2.1 重组菌的培养与诱导表达

4.2.2 粗酶液的提取

4.2.3 Ni柱亲和层析纯化

4.2.4 超滤离心纯化

4.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测

4.2.6 蛋白质浓度的测定

4.2.7 酶活力的检测

4.3 实验结果

4.3.1 粗酶液的表达检测

4.3.2 粗酶液的纯化

4.3.3 酶活力检测

4.4 小结

5 脱氯酶负载碳纳米管修饰电极还原脱氯DCM的降解

5.1 实验材料

5.1.1 实验药品

5.1.2 实验仪器

5.2 实验方法

5.2.1 溶液的配制

5.2.2 碳纳米管的酸化与表征

5.2.3 修饰电极的制备

5.2.4 电解装置

5.2.5分析方法

5.3 结果与讨论

5.3.1 酸化后碳纳米管的表征

5.3.2 修饰电极电生物还原脱氯反应产物定量分析

5.3.3 降解途径探讨

5.4 结论

6 结论与展望

6.1 结论

6.2 创新点

6.3 展望

参考文献

攻读硕士学位期间取得的主要成果

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