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别嘌醇钠注射液对大鼠重症急性胰腺炎的治疗作用及其机制的实验研究

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前 言

材料和方法

1 实验材料

2 实验方法

3 RT-PCR检测NF-κB mRNA和TNF-αmRNA的表达

4 统计学处理

结果

1 平均生存时间及72h小时生存率:

2 各组血清AMY、MDA、UA和TNF-α变化

3 病理结果

4 胰腺组织中NF-κB p65免疫组化IOD值结果

5 胰腺组织NF-κB p65 mRNA 和TNF-αmRNA 的RT-PCR结果

6 相关性分析

图 片

讨 论

I 大鼠重症急性胰腺炎的模型的建立和评价

2 氧化应激及其脂质过氧化产物MDA与急性胰腺炎的关系

3 TNF-a,NF-κB mRNA与大鼠急性胰腺炎的关系

4 别嘌醇钠对大鼠重症急性胰腺炎的影响

结论

参考文献

致谢

综述黄嘌呤氧化酶抑制剂与急性胰腺炎的关系

1 XOI与XO结合位点:

2 XOI对急性胰腺炎的可能机制:

参考文献

声明

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摘要

目的:通过检测别嘌醇钠注射液在大鼠重症急性胰腺炎模型中血清淀粉酶(AMY)、尿酸(UA)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-a及胰腺组织NF-KB mRNA和TNF-a mRNA表达,观察别嘌醇钠对SAP的治疗作用和探讨作用机制,为临床使用提供实验依据。方法:将120只健康成年雄性大鼠随机分为正常对照组(A组)、重症急性胰腺炎模型组(B组)、低剂量别嘌醇钠治疗组(C组)、高剂量别嘌醇钠治疗组(D组),每组30只。通过腹腔注射大剂量的10%L-精氨酸溶液制作大鼠SAP模型并注射别嘌醇钠。各组造模完成后12h、24h、48h三个时间点各取6只大鼠处死并收集标本,胰腺组织 HE染色后行光镜病理学检查,各时间点检测血清淀粉酶(AMY)、UA、MDA;血清TNF-α值使用酶联免疫吸附法(双抗体夹心 ABC-ELISA法)测定;免疫组织化采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法)检测胰腺组织中NF-κB p65的表达;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胰腺组织中NF-κB mRNA、TNF-α mRNA的表达;数据采用均数±标准差( X±s,n-6 )表示,采用统计软件SPSS17.0对所有数据进行统计学处理;样本均数的比较采用单因素方差分析(方差不齐者采用H检验);两者的相关性采用直线相关和直线回归分析;如果 P<0.05,则认为差异有统计学意义。结果:(1)A组大鼠全部存活;B组平均生存时间:60.58±34.84h,48h生存率:66.67%;C组平均生存时间:74.62±29.08h,48h生存率:83.33%。D组平均生存时间;81.41±26.52h,48h生存率83.33%;两个治疗组与B组的平均生存时间及生存率比较具有差异(P<0.05)。(2)B组大鼠造模后血清AMY、MDA在各时间点上明显高于A组(P<0.01),24h达到峰值;C组血清 AMY、MDA在24h,48h显著低于B组(P<0.01),C组血清MDA在24h,48h高于D组(P<0.05);B组血清AMY与同组前一时间点比较均有统计学差异(P<0.01);B组血清 MDA仅在24h与同组前一时间点比较有统计学意义(P<0.05)。(3)B组大鼠造模后血清TNF-α、IOD值在各时间点明显高于A组(P<0.01),在12h升高到峰值;C组在各时间点血清TNF-α显著低于B组(P<0.01);C组在24h、48h血清TNF-α水平显著高于D组(P<0.01),C组的IOD值在24h、48h明显高于D组(P<0.05);D组在48h血清TNF-α水平与同组前一时间点比较有显著差异(P<0.01);B、C和D组的IOD值与同组前一时间点之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。(4)B、C、D组的胰腺组织病理评分显著高于A组(P<0.01);C组病理评分均显著低于B组(P<0.01),高于D组(P<0.01);C组、D组病理评分低于同组前一时间点病理评分(P<0.05)。(5)B组 NF-κB p65 mRNA和TNF-αmRNA值各时间点皆高于A组(P<0.05);TNF-αmRNA在12h升高到峰值;C组造模后NF-κB p65 mRNA在12h,48h低于B组(P<0.05),在各时间点高于D组(P<0.05);C组TNF-αmRNA在各时间点低于B组(P<0.05),仅在12h高于D组(P<0.05);B组和C组NF-κBp65 mRNA、TNF-αmRNA与同组前一时间点有统计学差异(P<0.05);D组 NF-κB p65 mRNA仅在24h与同组前一时间点有统计学意义(P<0.05),D组TNF-αmRNA仅在12h与同组前一时间点有统计学意义(P<0.05)。(6)血清TNF-α、MDA、IOD与胰腺病理评分;TNF-α及IOD;NF-κB p65 mRNA和TNF-α mRNA呈正相关(r=0.94、r=0.76、r=0.93 r=0.86、r=0.93,P<0.01)。结论:(1)通过采用腹腔注射大剂量的10%L-精氨酸的方法,能够成功构建了重症急性胰腺炎的大鼠模型。(2)氧化应激( OS)及其脂质代谢产物MDA参与大鼠重症急性胰腺炎的发病过程。(3)L-精氨酸诱发大鼠重症急性胰腺炎后 TNF-α、NF-κB表达的上调,别嘌醇钠呈剂量依赖性抑制其表达。(4)别嘌醇钠对大鼠重症急性胰腺炎有治疗作用,可能通过抑制黄嘌呤氧化酶(XO)活性,减轻氧化应激和减少脂质代谢产物,进而抑制NF-κB激活,下调 TNF-a的过度释放,减轻胰腺损伤程度。

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