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应用单管PCR扩增测序分型法分析成都汉族HLA-DRB1基因多态性

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前言

实验材料和方法

1.样品：EDTA抗凝外周血2mL。

2.工具酶与生化试剂:

3.实验耗材:

4.仪器设备:

5.引物:

6.主要试剂配制:

7.DNA分子量标准（DNA Marker）：

结果与讨论

一、结果：

二.讨论

小结

参考文献

综述

读研期间发表论文

致谢

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摘要

研究背景与目的意义:
　　人类主要组织相容性抗原复合体(MHC)又称人类白细胞抗原(HLA),是目前所知最为复杂的遗传多态性系统,是调控人体特异性免疫应答和决定疾病易感性个体差异的主要基因系统。目前在人类学研究、法医学、免疫学、器官移植和疾病相关性研究等领域有广泛的应用。但因为HLA具有高度的多态性,其分布有显著人种、民族和地理的差别,使得某些基因的频率在不同种族之间差别很大。因此在研究HLA之前,必须先进行群体调查,建立不同民族基因数据库。直至目前中国人群HLA基因座基因多态性和分布频率的研究尚未充分进行,而四川汉族HLA-DRB1基因的分型资料更是空白。而目前对于HLA的研究,存在各种以PCR为基础的基因分型方法,虽比以往血清学和细胞学的方法大有改进,但仍觉繁琐,因此有必要寻找新型的方法,使研究工作更简便有效。此次应用新的DNA分型技术分析成都汉族个体HLA-DRB1等位基因分布频率,使以后HLA的研究工作更为快捷高效,同时为进一步研究HLA-DRB1与人体特异性免疫应答和疾病的关联提供背景资料。
　　材料与方法:
　　1)材料:
　　①样品:四川成都地区三代以内无血缘关系的汉族健康个体的外周血标本90份各2mL,以EDTA抗凝,年龄22-67岁,男36例,女54例。②工具酶与生化试剂:10×Buffer,25 mM MgCl2,2.5 mM dNTPs, TaqDNA聚合酶。无水乙醇、饱和酚,氯仿,浓盐酸,氯化钠,Tris、EDTA,琼脂糖。
　　2)方法:
　　①基因组DNA的提取。
　　②HLA-DRB1基因分型方法:将设计合成的8个引物和其它反应物放在一个反应管中扩增,然后将扩增产物进行琼脂糖电泳,阳性产物进行测序,对90名无血缘关系的健康个体进行HLA-DRB1基因分型。
　　结果:
　　共检出39种 HLA-DRB1等位基因,基因频率较高的有HLA-DRB1*0901(26.11％),1202(7.22%),同时检测出HLA-DRB1*AHAW、HLA-DRB1*DRw12、HLA-DRB1*w13b等少见等位基因。统计分析表明该群体 HLA-DRB1位点的基因型分布符合 Hardy Weinburg平衡(χ2=806.46,df=780,P>0.05)。
　　结论:
　　①证实了单管PCR扩增测序分型法用于HLA-DRB1基因分型的可靠性和适用性,比以往其它的SBT-PCR的方法简便快捷和高效。
　　②提供了成都汉族群体的基因分布频率资料,为进一步研究 HLA-DRB1与人体特异性免疫应答及疾病的关联提供背景资料.

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