声明
摘要
1前言
1．1蓝果忍冬概述
1．2花色苷概述
1．3植物花色苷的生物合成途径
1．4花色苷生物合成相关转录因子研究进展
1．4．1 bHLH转录因子
1．4．2 MYB转录因子
1．4．3 WD40转录因子
1．4．4 MBW(MYB-bHLH-WD40)复合蛋白
1．5转录组测序加快新基因的发现
1．6本研究的主要内容和技术路线
1．6．1主要内容
1．6．2技术路线
1．7目的意义
2材料与方法
2．1材料
2．1．1植物材料
2．1．2试验试剂及菌株
2．2方法
2．2．1 De novo转录组测序
2．2．2 bHLH蛋白的基因功能注释与鉴定
2．2．3蓝果忍冬bHLH蛋白进化树分析
2．2．4蛋白保守基序鉴定
2．2．5 RNA提取与cDNA第一链的合成
2．2．6蓝果忍冬bHLH家族基因qPCR分析
2．2．7总花色苷含量测定
2．2．8 LcTT8基因的克隆
2．2．9 LcTT8基因的序列分析
2．2．10 LcTT8表达模式分析
2．2．11 LcTT8亚细胞定位分析
2．2．12 LcTT8基因对烟草的遗传转化
2．2．13转基因烟草叶片花色苷合成酶活性及基因表达量分析
2．2．14转基因烟草的花色苷含量及组分分析
3结果与分析
3．1蓝果忍冬bHLH转录因子鉴定与注释
3．2蓝果忍冬bHLH转录因子进化树和基序分析
3．3蓝果忍冬和拟南芥bHLH转录因子进化关系对比
3．4蓝果忍冬总RNA的提取
3．5蓝果忍冬bHLH家族基因表达分析
3．6 LcTT8基因的克隆与鉴定
3．7 LcTT8基因的序列分析
3．7．1 LcTT8序列分析
3．7．2系统进化树分析
3．8 LcTT8基因表达模式分析
3．8．1 LcTT8在蓝果忍冬上的组织特异性表达分析
3．8．2 LcTT8在蓝果忍冬果实不同发育时期的表达
3．9 LcTT8转录因子亚细胞定位
3．9．2 LcTT8-EGFP在拟南芥原生质体中的定位
3．10 LcTT8转录因子功能分析
3．10．2 pBI121-LcTT8植物过量表达载体转入根癌农杆菌
3．10．3转基因烟草抗性植株的筛选
3．10．4转基因烟草的PCR鉴定
3．10．5 LcTT8转基因烟草的表型分析
3．10．6转基因烟草花色苷合成酶活性及基因表达量分析
3．10．7转基因烟草的花色苷组分分析
4．讨论
4．1蓝果忍冬bHLH家族功能预测
4．2参与蓝果忍冬果实花色苷合成的bHLH基因
4．3 LcTT8基因调控蓝果忍冬花色苷合成模式
4．4 LcTT8是核主效蛋白
4．5 LcTT8对花色苷合成酶基因表达及活性的调控
4．6 LcTT8对花色苷含量变化的影响
5结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
