响应面优化ARA发酵培养基及高产EPA工程菌构建的初步研究

声明

摘要

缩略词表

第一章绪论

1．1多不饱和脂肪酸ARA和EPA

1．1．1花生四烯酸ARA简介

1．1．2二十碳五烯酸EPA简介

1．2高山被孢霉简介

1．2．1高山被孢霉生理特性与安全性

1．2．2高山被孢霉产ARA和EPA研究概况

1．3丝状真菌遗传转化系统

1．3．1丝状真菌的遗传转化技术

1．3．2高山被孢霉遗传转化技术的研究现状

1．4 CRISPR／Cpf1基因编辑系统

1．4．2 CRISPR／Cpf1系统的应用

1．5本课题研究的内容和意义

第二章材料与方法

2．1实验材料

2．1．1实验菌株与质粒

2．1．2实验试剂

2．1．3实验仪器

2．1．4培养基与缓冲溶液的配制

2．1．5引物序列

2．2实验方法

2．2．1高山被孢霉的培养与保藏

2．2．2培养基优化实验设计

2．2．3质粒构建

2．2．4根癌农杆菌C58C1介导的高山被孢霉G12遗传转化

2．2．5分析测定

第三章结果与讨论

3．1响应面法优化高山被孢霉产ARA发酵培养基

3．1．1 Plackett-Burman实验

3．1．2最陡爬坡试验

3．1．3 Box-Behnken响应面优化实验

3．1．4响应面分析

3．1．5产量验证

3．2高山被孢霉表达△17脂肪酸脱氢酶重组菌株的构建

3．2．1农杆菌质粒消除

3．2．2高山被孢霉对萎锈灵的敏感性实验

3．2．3质粒构建

3．2．4农杆菌转化高山被孢霉

3．2．5发酵验证EPA产量

3．3基于CRISPR／Cpf1真菌敲除质粒的构建

3．3．1高山被孢霉对5-FOA敏感性实验

3．3．2质粒构建

3．3．3农杆菌转化高山被孢霉

3．4本章小结

第四章结论与展望

4．1主要结论

4．2展望

参考文献

致谢

在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果