海洋新型α-淀粉酶AmyP的耐受性研究及其C末端结构域的功能鉴定

声明

摘要

符号说明

第一章 前言

1．α-淀粉酶概述

1．1 α-淀粉酶

1．2 α-淀粉酶的催化机理

1．3 α-淀粉酶的测定方法

1．4 α-淀粉酶的应用

1．5 α-淀粉酶的耐受性研究

1．6 海洋新型α-淀粉酶AmyP

2 碳水化合物结合结构域

3 淀粉结合结构域

4 选题依据、意义及主要研究内容

4．1 研究目的

4．2 研究意义

4．3 研究内容

第二章 α-淀粉酶AmyP的耐受性研究

1 实验材料

1．1 菌株和质粒

1．2 主要试剂

1．3 培养基和各种试剂的配制

1．4 仪器

2 实验方法

2．1 重组质粒的电转化

2．2 重组蛋白的IPTG诱导表达

2．3 重组蛋白纯化

2．4 AmyP耐受性的测定

3 结果与讨论

3．1 金属离子和EDTA对AmyP酶活的影响

3．2 NaCl对AmyP酶活的影响

3．3 有机溶剂对AmyP稳定性的影响

3．4 氧化剂和还原剂对AmyP稳定性的影响

3．5 表面活性剂对AmyP稳定性的影响

3．6 结论

第三章 AmyP淀粉结合结构域(SBD)的功能鉴定

1 实验材料

1．1 菌株和质粒

1．2 主要试剂

1．3 试剂的配制

2 实验方法

2．1 蛋白质浓度的测定

2．2 SBD的克隆、表达和纯化

2．3 SBD的序列比对

2．4 SBD的吸附实验

2．5 AmyP与AmyP△SBD酶动力学参数比较

2．6 蛋白的亲和凝胶电泳

3 结果

3．1 序列分析

3．2 假定SBD的克隆与表达

3．2 SBD的亲和凝胶电泳

3．3 SBD与生淀粉的吸附率测定

3．4 AmyP与AmyP△SBD酶动力学参数比较

3．5 AmyP、AmyP△SBD、SBD亲和电泳

3．6 讨论

参考文献

在读期间发表论文情况

致谢