拟南芥5，10-亚甲基四氢叶酸脱氢酶/5，10-次甲基四氢叶酸环化酶基因克隆和功能的研究

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声明

第一章 前言

1.1 5,10-亚甲基四氢叶酸脱氢酶分类及其特点

1.2 5,10-亚甲基四氢叶酸脱氢酶的纯化及其性质

1.3 5,10-亚甲基四氢叶酸脱氢酶基因及其表达和调控

1.4本文的研究目标

第二章 拟南芥DHY/CYC基因的克隆

2.1实验材料

2.1.1实验样品

2.1.2菌种

2.1.3载体

2.1.4工具酶

2.1.5测序及引物合成

2.1.6化学试剂

2.2实验方法

2.2.1拟南芥的栽培

2.2.2 CTAB法提取基因组DNA

2.2.3拟南芥RNA提取

2.2.4反转录

2.2.5拟南芥DHY/CYC基因编码区的克隆

2.3结果与讨论

2.3.1 DHY/CYC的cDNA克隆

2.3.2 DHY/CYC cDNA克隆的序列分析

2.3.3编码区克隆的系统遗传学分析

2.3.4 DHY/CYC 预测蛋白的亚细胞定位

2.3.5讨论

第三章 拟南芥DHY/CYC基因的过表达研究

3.1实验材料

3.2方法

3.2.1入门载体构建

3.2.2表达载体构建

3.2.3农杆菌LBA 4404电击感受态细胞的制备和农杆菌转化

3.2.4拟南芥转化(Floral Dipping法)

3.2.5转基因植株的筛选和鉴定

3.3结果与讨论

3.3.1 FL1，FL2和FL3过量表达载体的构建

3.3.2抗性筛选阳性幼苗

3.3.3讨论

第四章 DHY/CYC基因的原核表达

4.1实验材料

4.2实验方法

4.2.1原核表达载体构建

4.2.2含靶基因的质粒在大肠杆菌中的诱导表达及电泳检测

4.3结果与讨论

4.3.1原核表达载体构建

4.3.2蛋白质序列分析

4.3.3讨论

展望

参考文献

攻读学位期间公开发表的论文

致 谢