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TRPC对腹水综合征肉鸡肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

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肉鸡肺动脉高压综合征（pulmonary hypertension syndrome，PHS）又叫做肉鸡腹水综合征（ascites syndrome，AS），是一种由多种因素共同作用所产生的营养代谢病，其主要危害生长较快的肉鸡。肺血管重构和肺血管收缩反应增强是PHS主要的两个病理变化。肺动脉所产生的这种病理变化与肺动脉平滑肌细胞的异常增殖密切相关。规范瞬时受体电位离子通道（canonical transient receptor potential channel，TRPC）是细胞膜上钙离子内流的主要通道，与细胞的程序性死亡、转录因子的活化和细胞增殖密切相关。目前虽在哺乳动物身上发现TRPC与肺动脉平滑肌细胞的异常增殖密切相关，但其在PHS肉鸡肺动脉病理变化中的作用尚未见报道。本研究从肺动脉平滑肌细胞中TRPC 诱导的钙离子内流对肺动脉平滑肌细胞的增殖和凋亡的作用入手，进一步研究PHS的发病机制，为防治肉鸡PHS提供新的思路以及理论支持。　　在体内实验部分，将20日龄的肉鸡随机分为对照组（n=30）和实验组（n=90），实验组肉鸡静脉注射浓度为0.02g/mL的离子交换纤维素颗粒0.3 mL，对照组注射等体积的生理盐水。在 42 日龄时进行采样，并测量肉鸡腹水发生的相关指标变化和肺血管张力。同时，检测肺组织和肺动脉中TRPC1、TRPC4和TRPC6 mRNA的表达情况，并使用免疫组化检测 TRPC6 在肉鸡肺组织中的分布情况。结果发现实验组肉鸡的右心室与全心室重量比，红细胞压积，血清中的谷草转氨酶和三磷酸激酶均极显著升高（P＜0.01）。实验组肉鸡肺血管弹性极显著下降（P＜0.01），对钙离子阻断剂的敏感性下降，且实验组肉鸡的肺组织和心肌都出现了明显的病理变化。实验组肉鸡心肌中游离钙离子浓度极显著提升（P＜0.01）。在肺动脉中TRPC1 mRNA的表达量显著降低（P＜0.05），但TRPC4和TRPC6 mRNA表达显著升高（P＜0.05）。在肺组织中TRPC1 mRNA表达量显著降低（P＜0.05），TRPC4 mRNA表达量显著升高（P＜肉鸡肺动脉上表达增多。　　在体外实验部分，使用II型胶原酶消化法培养原代PASMCs，分别在常氧和缺氧的条件下处理细胞，并使用TRPC6抑制剂SKF96365和阻断剂氟芬那酸（Flufenamic acid，FFA）处理细胞，检测细胞活力，细胞TRPC1、TRPC4和TRPC6 mRNA表达的影响，并使用流式细胞仪检测细胞内游离钙离子浓度、细胞周期和细胞凋亡的情况。结果发现，在缺氧24h时PASMCs细胞活力，细胞中TRPC1、TRPC4和TRPC6 mRNA表达量没有明显变化（P＞0.05）；而在缺氧48 h时细胞活力，细胞中TRPC1、TRPC4和TRPC6 mRNA表达量均显著升高（P＜0.05），但G1期的细胞比例显著下降（P＜0.05）， S期细胞比例极显著上升（P＜0.01）。同时，缺氧48 h时，总的细胞凋亡和早期凋亡的细胞比例极显著下降（P＜0.01）。而在使用TRPC6的抑制剂SKF96365处理缺氧的PASMCs 24h后，与缺氧PASMCs相比，TRPC6 mRNA表达量、细胞活力、细胞内游离钙离子浓度均显著下降（P＜0.01），但是细胞在 G1 期的比例显著上升（P＜24h后，与缺氧PASMCs相比，细胞活力、细胞内游离钙离子浓度、细胞内TRPC6 mRNA的表达量均显著升高（P＜0.05），且细胞凋亡细胞比例及细胞在S期和G2期的比例显著上升（P＜0.01）。但是SKF96365和FFA处理缺氧PASMCs 48h后，与缺氧PASMCs相比，细胞周期以及细胞凋亡未发生明显变化（P＞0.05）。　　结果表明，PHS肉鸡血管弹性变差，TRPC参与了PHS肉鸡肺组织和肺动脉的病理变化，且缺氧PASMCs的异常增殖以及凋亡减少与TRPC密切相关。

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