声明
符号说明
1前言
1.1奶牛乳房炎简介
1.1.1奶牛乳房炎的分类
1.1.2奶牛乳房炎的病因
1.1.3奶牛乳腺炎的防治
1.2金黄色葡萄球菌的简介
1.2.1金黄色葡萄球菌的流行
1.2.2金黄色葡萄球菌的危害
1.2.3金黄色葡萄球菌与奶牛乳房炎
1.3细胞自噬的简介
1.3.1细胞自噬的信号通路
1.3.2自噬与金黄色葡萄球菌
1.4 MAPK的简介
1.4.1 P38MAPK 简介
1.4.2 P38 MAPK 与细胞自噬
1.5目的与意义
2.材料与方法
2.1试验细胞以及细菌菌株
2.2 主要试验试剂
2.3 主要试验仪器
2.4相关试验试剂的配制
2.4.1 p38MAPK 抑制剂 SB203580 的配制
2.4.2 p38MAPK 激活剂 anisomycin 的配制
2.4.3溶葡萄球菌酶的配制
2.4.5庆大霉素的配制
2.4.6 Tris-hcl PH7.5 的配制
2.4.7 细胞生长培养基的配制
2.4.8 血清的灭活
2.4.9 冻存液的制备
2.4.10细菌培养基的配制
2.4.11磷酸盐缓冲液（PBS）的配制
2.4.12 5× SDS-PAGE 电泳缓冲液的配制
2.4.13 1×膜转移缓冲液的配制
2.4.14 1×TBS 溶液的配制
2.4.15 1×TBST溶液的配制
2.4.16 封闭液的配制
2.4.17 10%过硫酸铵(AP)的配制
2.4.18 丙烯酰胺的配制
2.5试验方法
2.5.1细菌培养
2.5.2细菌的冻存
2.5.3细菌的复苏
2.5.4细胞培养
2.5.5细胞的传代
2.5.6细胞冻存
2.5.7细胞的复苏
2.5.7金黄色葡萄球菌细胞内感染模型的建立
2.5.8 细胞免疫荧光试验
2.5.9自噬体观察
2.5.10细胞内金黄色葡萄球菌存活测定
2.5.11蛋白免疫印迹
2.5.12统计学分析
3.结果
3.1金黄色葡萄球菌入侵细胞激活P38MAPK通路
3.2 P38α的活化抑制了自噬流的产生
3.3 P38α通过改变 LC3 和 P62 蛋白的水平抑制金葡菌诱导的自噬
3.4 P38α通过磷酸化 ULK1ser757位点水平抑制金黄色葡萄球菌诱导的自噬
3.5 细胞内金黄色葡萄球菌的存活
4.讨论
5.结论
参考文献
致谢
山东农业大学;
