细菌膜囊泡间体介导H2O2外排的耐药机制研究

声明

第1章 文献综述

1.1 活性氧的产生、功能及代谢

1.2 ROS及H2O2参与抗生素的杀菌机制

1.3 间体的形成与功能

1.4 间体及H2O2参与的耐药机制

第2章 离体间体的性状研究

2.1 实验材料与仪器

2.1.1 主要试剂

2.1.2 主要仪器

2.2 实验方法

2.2.1 供试菌株

2.2.2 抗生素胁迫诱导间体的产生及其粗提

2.2.3 离体间体的提纯

2.2.4 NTA技术观测离体间体

2.2.5 LC-MS/MS分析离体间体的蛋白组分

2.3 实验结果与分析

2.3.1 离体间体的SDS-PAGE分析

2.3.2 离体间体的TEM观察

2.3.3 离体间体的NTA分析

2.3.4 离体间体蛋白组分的LC-MS/MS分析

2.4 讨论

第3章 大肠杆菌间体相关基因的转录组分析及筛选

3.1 实验材料与仪器

3.1.1 主要试剂

3.1.2 主要仪器

3.2 实验方法

3.2.1 供试菌株

3.2.2 抗生素诱导间体形成

3.3 实验结果与分析

3.3.1 表达差异基因分析

3.3.2 基因集的GO注释和KEGG注释

3.3.3 间体相关基因的基因集的Venn分析

3.4 讨论

第4章 构建间体相关基因的突变株

4.1 实验材料与仪器

4.1.1 主要试剂

4.1.2 主要仪器

4.2 实验方法

4.2.1 供试菌株

4.2.2 涉及的相关基因和设计的引物

4.2.2 化学转化法制备感受态细胞的制备

4.2.3 电转化感受态细胞的制备及电转化参数

4.2.4 构建过表达突变株

4.2.5 构建敲除突变株

4.2.6 构建回补株

4.3 实验结果与分析

4.3.1 构建基因过表达菌株的结果

4.3.2 构建基因缺失菌株的结果

4.3.3 构建基因回补菌株的结果

4.4 讨论

第5章 间体外排H2O2在细菌耐药中的影响

5.1 实验材料与仪器

5.1.1 主要试剂

5.1.2 突变株的遗传背景信息

5.1.3 主要仪器

5.2 实验方法

5.2.1 突变株的耐药性分析

5.2.2 生物透射电镜样品的制备

5.2.3 胞外H2O2水平统计

5.3 实验结果与分析

5.3.1 突变株的耐药结果

5.3.2 突变株中间体外排H2O2积累量的统计及分析

5.4 讨论

第6章 结论

参考文献

缩略语词汇表

致谢

攻读学位期间的研究成果