声明
第一章 文献综述
1.1.1 小麦条锈病的危害
1.1.2 小麦条锈菌的侵染特征
1.1.3 小麦条锈菌的致病机制研究进展
1.2 植物的多层免疫反应
1.2.1 植物免疫系统PTI
1.2.2 植物免疫系统ETI
1.3 病原菌效应蛋白研究进展
1.3.1 病原菌效应蛋白的基本特征
1.3.2 病原菌质外体效应蛋白
1.3.3 病原菌胞质效应蛋白
1.4 植物pre-mRNA可变剪切机制研究
1.4.1 植物可变剪切分子机制
1.4.2 核斑点的研究进展
1.4.3 pre-mRNA可变剪切的调控
1.4.4 SR蛋白的研究进展
1.4.5 剪切体蛋白的互作网络研究
1.4.6 植物逆境胁迫中可变剪切的研究进展
1.5 类病斑植株
1.6 本研究选题依据
第二章 小麦条锈菌效应蛋白Pst_A23 的鉴定与功能分析
2.0引言
2.1.1 实验材料
2.1.2 试剂及仪器
2.2.1 Pst_A23的生物信息学分析
2.2.2 Pst_A23信号肽分泌功能验证
2.2.3 RNA样品提取与反转录
2.2.4 Pst_A23抑制Bax诱导的PCD实验
2.2.5 Pst_A23抑制DC3000诱导的PCD实验
2.2.6 Pst_A23抑制胼胝质的积累实验
2.2.7 Pst_A23基因表达模式分析
2.2.8 HIGS技术瞬时沉默Pst_A23
2.2.9 Pst_A23转基因材料的创制与鉴定
2.2.10 组织学样品处理及观察方法
2.3结果与分析
2.3.1 小麦条锈菌效应蛋白Pst_A23的特征性分析
2.3.2 效应蛋白Pst_A23的信号肽具有分泌功能
2.3.3 效应蛋白Pst_A23抑制Bax，DC3000诱导的细胞坏死
2.3.4 效应蛋白Pst_A23能够抑制植物PTI反应
2.3.5 Pst_A23在条锈菌侵染阶段上调表达
2.3.6 瞬时沉默Pst_A23减弱条锈菌致病力
2.3.7 Pst_A23为条锈菌的至关重要的致病因子
2.4讨论
第三章 剪切调控子Pst_A23参与pre-mRNA剪切抑制植物免疫
3.0 引言
3.1.1植物材料
3.1.2试剂及仪器
3.2 实验方法
3.2.1 RNA提取与反转录
3.2.2 原核表达蛋白及纯化
3.2.3 Pst_A23的亚细胞定位
3.2.4 烟草细胞核提取方法
3.2.5 免疫共沉淀质谱分析
3.2.6 双分子荧光互补实验（BIFC）
3.2.7 免疫共沉淀实验（co-IP）
3.2.8 Pst_A23与RNA样品的体外互作
3.2.9 萤火虫荧光素酶（LUC）互补实验
3.2.10 微量热泳动技术验证TaSR34与Pst_A23互作
3.2.11过表达Pst_A23转基因材料转录组测序
3.2.12 RNA凝胶阻滞实验
3.3结果与分析
3.3.1 Pst_A23定位植物细胞核核斑点
3.3.2 R2-rich结构域决定Pst_A23蛋白的定位
3.3.3 免疫共沉淀-质谱测序分析
3.3.4 Pst_A23与TaSR34互作
3.3.5 Pst_A23与TaU1互作
3.3.6 Pst_A23过表达转基因小麦转录组测序与鉴定差异基因
3.3.7 Pst_A23调控靶基因mRNA的可变剪切
3.3.8 瞬时沉默TaWRKY53 和TaXa21降低了小麦对条锈菌的抗性
3.3.9 Pst_A23特异结合靶基因剪切位点的RNA基序元件
3.4讨论
第四章 TaSR34介导pre-mRNA 可变剪切调控植物免疫
4.0 引言
4.1.1 实验材料
4.1.2 试剂及仪器
4.2 实验方法
4.2.1 TaSR34亚细胞定位方法
4.2.2 创制拟南芥转基因材料
4.2.3 激发子Flg22处理拟南芥
4.2.4 拟南芥样品的处理
4.2.5 TaSR34转基因小麦材料的创制
4.2.6 拟南芥转录组测序
4.3 实验结果
4.3.1 TaSR34序列特征分析
4.3.2 TaSR34定位细胞核核斑点
4.3.3 TaSR34在小麦与条锈菌非亲和体系受条锈菌诱导上调表达
4.3.4 瞬时沉默TaSR34减弱了小麦对条锈菌的抗性
4.3.5 TaSR34的RNAi 转基因小麦植株降低了对条锈菌的抗性
4.3.6 过表达TaSR34诱导植物细胞坏死
4.3.7 过表达TaSR34增强转基因拟南芥的植物抗性
4.3.8 过表达TaSR34调控SA相关基因的表达
4.3.9 TaSR34影响拟南芥相关基因的剪切效率
4.3.10 TaSR34与剪切体成分TaU1互作
4.3.11 TaSR34与Pst_A23调控的RNA靶点互作
4.4 讨论
第五章 全文结论与展望
参考文献
附录
致 谢
作者简介
西北农林科技大学;
