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基于MALDI--TOF MS和LC--MS/MS的临床检验新技术的应用研究

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摘要

缩略词表

前言

第一部分 MALDI-TOF MS和纳米介孔材料联合技术及其在尿液本周蛋白检测中的应用

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

第二部分 基于LC-MS／MS的非标定量宏蛋白质组学技术及其在结直肠癌患者肠道微生物研究中的应用

一、材料与方法

二、实验结果

三、讨论

全文总结

参考文献

综述:基于质谱的蛋白质组学在临床检测中的应用

攻读学位期间发表的论文

致谢

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摘要

由于分析速度快、灵敏度高、检测范围广和通量高，质谱技术在临床检验实验室有着广泛的应用价值。在所有的质谱技术中，MALDI-TOF MS和LC-MS/MS在临床检验的应用最广泛。因此，本课题对MALDI-TOF MS和LC-MS/MS技术的临床应用进行了初步研发，为质谱技术的临床应用提供坚实的研究基础。　　第一部分 MALDI-TOF MS和纳米介孔材料联合技术及其在尿液本周蛋白检测中的应用　　本周蛋白(Bence-Jones protein)是多发性骨髓瘤患者尿液中的生物标志物。传统的检测本周蛋白的方法灵敏度低或者是费时费力。本部分建立了一种基于纳米介孔硅材料和MALDI-TOF MS联合技术来检测多发性骨髓瘤患者尿液中本周蛋白的新方法。大孔有序硅泡沫材料(Macroporous Ordered Silica Foams，MOSF)用于富集尿液中的本周蛋白，之后用MALDI-TOF MS分析材料-蛋白复合物。基于MALDI-TOF MS质谱图上的一对特异性的本周蛋白质谱峰，本周蛋白得以检测并可以用于诊断多发性骨髓瘤。该研究使用这种方法检测了21份多发性骨髓瘤患者和27份健康对照者的尿液样本。该方法的灵敏度和特异度分别是95.24％(20/21)和100％(27/27)。与免疫固定电泳和免疫比浊法等其他检测本周蛋白的方法相比，该方法具有快速，方便和成本低的优点，未来也许可以成为检测尿液中本周蛋白的新方法。　　第二部分 基于LC-MS/MS的非标定量宏蛋白质组学技术及其在结直肠癌患者肠道微生物研究中的应用　　基于LC-MS/MS的宏蛋白质组学技术常用于研究肠道微生物的功能学特征。结直肠癌是最常见的肿瘤之一，肠道微生物群的改变与结直肠癌的发生密切相关。之前对肠道微生物的研究主要集中在微生物的组成和分类学的丰度变化上，而对结直肠癌患者的肠道微生物的功能学方面的研究很少。因此本课题收集了14份治疗前的结直肠癌患者和14份健康志愿者的粪便样本，使用基于LC-MS/MS的非标记定量宏蛋白质组学方法对肠道微生物的蛋白质进行鉴定与定量。该部分实验结果中，总共鉴定到了30545个蛋白和84217个肽段，它们分别归属于178个细菌属。通过比较病例组与健康对照组的微生物蛋白，本研究发现了332个差异蛋白(P＜0.05，fold change(P/H)＞2或fold change(P/H)＜0.05)。在这332个差异蛋白中与铁摄入/转运，氧化应激和DNA复制，重组和修复相关的蛋白质丰度显著改变。有25个差异蛋白与铁摄取/转运相关，有30个蛋白与氧化应激相关。这表明在结直肠癌患者大肠中局部铁浓度较高，氧化应激反应活跃。通过宏蛋白质组学分析，该实验也发现了一些新的结直肠癌患者细菌分类学差异和新的细菌蛋白标志物。该部分的实验研究表明肠道微生物参与结直肠癌的发病不仅是因为细菌分类学的变化而且是因为细菌功能活动的变化。

著录项

  • 作者

    龙曙萍;

  • 作者单位

    中国人民解放军海军军医大学海军军医大学;

  • 授予单位 中国人民解放军海军军医大学海军军医大学;
  • 学科 临床检验诊断学
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 邓安梅;
  • 年度 2019
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类
  • 关键词

    软电离生物质谱,液相二级质谱,尿液检测,肠道微生物;

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