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内质网相关降解通路小分子抑制剂对肿瘤细胞的抑制作用以及肿瘤干细胞的内质网应激调控机制研究

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导语

第一部分 内质网相关降解通路小分子抑制剂与传统抗癌药物联合运用对肿瘤细胞的抑制作用

摘要

第一章 前言

第二章 材料与方法

第三章 结果

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

第二部分 探索肿瘤干细胞的内质网应激反应

摘要

第一章 前言

第二章 材料与方法

第三章 结果

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述 内质网应激与肿瘤干细胞的研究进展

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摘要

本文从以下几部分进行了论述：
　　第一部分 内质网相关降解通路小分子抑制剂与传统抗癌药物联合运用对肿瘤细胞的抑制作用
　　目的：
　　探究内质网相关降解通路(Endoplasmic Reticulum-Associated Degradation，ERAD)小分子抑制剂EeyarestatinI(EerI)与传统抗癌药物联合运用对肿瘤细胞的抑制作用。
　　方法：
　　不同剂量的EerI处理结肠癌SW480和胰腺癌PANC-1细胞，MTS法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡率;EerI单独或与抗癌药物顺铂(cisplatin，CDDP)和硼替佐米(Bortezomib，BTZ)联用处理SW480和PANC-1细胞，MTS法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blot法检测细胞中Poly ADP-ribosepolymerase（PARP）及其剪切体和糖调节蛋白（GRP78/BiP）的蛋白表达。
　　结果：
　　EerI抑制SW480和PANC-1细胞增殖、促进细胞凋亡(P＜0.01)，且呈剂量-效应关系;联合用药的实验结果显示EerI提高了SW480和PANC-1细胞对CDDP和BTZ的敏感性(P＜0.01);Westernblot结果表明，联合用药促进了PARP在SW480和PANC-1细胞中的剪切，同时BTZ处理可提高BiP蛋白的表达，提示了内质网应激(Endoplasmic Reticulum stress，ERS)反应的激活。
　　结论 ERAD通路抑制剂EerI可明显增强传统抗癌药物CDDP和BTZ的抗癌活性，这为抗癌新药研发及肿瘤耐药性逆转剂的研究提供了新的线索。
　　第二部分 探索肿瘤干细胞的内质网应激反应
　　目的：
　　建立以成球培养法为主的体外富集人乳腺癌细胞MDA-MB-231肿瘤干细胞(Breast cancer stem cell，BCSC)的方法，并运用内质网应激反应(endoplasmicreticulum stress，ERS)诱导剂处理肿瘤干细胞，探究其内质网应激反应的变化以及内质网应激反应对干性的影响并对其机制进行初步探索。
　　方法：
　　采用无血清低吸附板培养MDA-MB-231细胞，获得细胞球，裸鼠实验检测其体内成瘤能力，RT-PCR，Western Blot检测其干性标志物及内质网应激相关标志物在mRNA和蛋白水平的表达;将内质网应激诱导剂Tunicamycin和Thapsigargin加入成球培养基，检测内质网应激对成球的影响以及干性标志在RNA和蛋白水平的变化;结晶紫试验检测Tunicamycin和thapsigargin对2D成克隆能力的影响;流式细胞术检测Tunicamycin对贴壁培养的MDA-MB-231细胞ALDH+细胞侧群的影响;Western Blot检测不同程度的内质网应激对与干性相关的蛋白质如Skp2等的影响。
　　结果：
　　体外无血清培养，一周可获得较大的乳腺癌细胞球，其高表达Sox2、Nanog、Oct4等干性标志物，具有高致瘤性;与贴壁细胞相比，细胞球有明显的内质网应激反应，呈现XBP-1剪切、GRP78、CHOP、ATF4显著高表达;内质网应激反应可明显减弱成球能力和2D成克隆能力并下调ALDH+细胞侧群和与干性相关蛋白质如Sox2表达。
　　结论：
　　成球培养法可成功富集到乳腺癌干细胞;乳腺癌干细胞有显著的内质网应激;诱导乳腺癌干细胞内质网应激可降低其干性。

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