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滇龙胆GrSLS1基因的克隆与原核表达

         

摘要

以滇龙胆转录组为基础,采用RT PCR技术克隆了滇龙胆幼叶裂环番木鳖苷合酶基因,命名为GrSLS1(GenBank登录号KF941191).序列分析结果显示,GrSLS1基因开放阅读框长1 560 bp,编码519个氨基酸;GrSLS1蛋白相对分子量为59.33 kD,pI为8.96.生物信息学分析结果表明,GrSLS1蛋白属于SLS家族成员,其N端含有一跨膜螺旋区域(10~32);二级结构分析结果表明,GrSLS1蛋白主要由α螺旋和无规则卷曲组成;系统发育分析表明,GrSLS1与帽柱木MsSLS2蛋白亲缘关系最近.构建原核表达载体pGEX 4T GrSLS1,对GrSLS1基因进行原核表达,SDS PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致.该研究为进一步研究GrSLS1基因功能及通过在龙胆中过表达该基因提高龙胆苦苷含量奠定基础.

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