KSHV K15P慢病毒载体的构建及其滴度测定

许常青; 陈伟; 方圆; 汪小五; 王林定

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目的构建含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV) ORFK15P基因的慢病毒载体,并对其在293T细胞内的表达进行研究.方法 PCR法扩增获得KSHV K15P基因,限制性内切酶Nhe Ⅰ酶切和无缝克隆法构建重组慢病毒载体pCDH-CMV-K15P-GFP,通过脂质体转染试剂将重组慢病毒载体与3种辅助质粒pMDL-PRRE、pRSV-Rev和pMD2.g共转染HEK 293T细胞包装产生慢病毒,Westem blot法检测K15P蛋白的表达.结果经酶切及测序鉴定,成功构建慢病毒载体,重组慢病毒质粒与辅助质粒共转染HEK 293T细胞可见有荧光表达,说明K15P基因在细胞内有表达并且96 h后产生4×106 TU/ml滴度为慢病毒.结论成功构建了KSHVK15P慢病毒表达载体pCDH-CMV-K15P-GFP,获得高效表达K15P基因的慢病毒颗粒,为后续其在细胞内的功能研究奠定实验基础.

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来源
《安徽医科大学学报》 |2016年第10期|1417-1420|共4页
作者
许常青; 陈伟; 方圆; 汪小五; 王林定;
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作者单位

安徽医科大学微生物学教研室;

合肥230032;

合肥市第三人民医院检验科;

合肥230000;

安徽医科大学微生物学教研室;

合肥230032;

安徽医科大学微生物学教研室;

合肥230032;

安徽医科大学微生物学教研室;

合肥230032;

安徽医科大学微生物学教研室;

合肥230032;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类其他病毒;
关键词
卡波肉瘤相关疱疹病毒; K15P基因; 慢病毒;

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