小鼠MME基因真核表达载体的构建与鉴定

许建明; 石海; 梅俏; 汪学龙; 宋育林; 鲍俊俊; 董钟云

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目的克隆小鼠巨噬细胞金属弹力酶(MME)基因结构域Ⅰ和Ⅱ,构建真核细胞表达载体,用于动物肿瘤原位种植模型的研究.方法通过PCR选择性扩增MME基因结构域Ⅰ和Ⅱ,克隆入pGEM-T载体中,限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因后,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,并进行双酶切及PCR鉴定.结果以MME cDNA为模板进行PCR扩增的特异性片段在750 bp和1 000 bp之间.以此构建的pGEM-T-MME克隆载体和表达载体, 经限制性内切酶酶切证实载体中带有MME目的基因片段; 与小鼠MME cDNA序列的碱基符合率为99.63%; 证明MME基因已正确克隆到了真核细胞表达载体pcDNA3.1中.结论成功构建了pcDNA3.1-MME重组质粒,奠定了转基因研究MME表达与肿瘤生长转移关系的实验基础.

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来源
《安徽医科大学学报》 |2004年第1期|19-21|共3页
作者
许建明; 石海; 梅俏; 汪学龙; 宋育林; 鲍俊俊; 董钟云;
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作者单位

安徽医科大学第一附属医院消化内科,合肥,230022;

安徽医科大学第一附属医院消化内科,合肥,230022;

安徽医科大学第一附属医院消化内科,合肥,230022;

安徽医科大学寄生虫教研室,合肥,230032;

安徽医科大学第一附属医院消化内科,合肥,230022;

安徽医科大学第一附属医院消化内科,合肥,230022;

美国得克萨斯州大学,M.D.Anderson癌症中心;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类免疫细胞生物学;
关键词
巨噬细胞金属弹力酶; 基因克隆; 重组;

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