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三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响

         

摘要

目的观察标记引物法、随机渗入标记法、末端转移标记法三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响.方法将淋球菌gyrA基因91位密码子突变型探针倍比稀释成终浓度为1 000 μmol/L~0.25 μmol/L的梯度浓度点样并制作寡核苷酸芯片,PCR扩增荧光标记包含gyrA基因突变的目的DNA片段,与芯片杂交,分别记录三种标记方法的杂交信号强度.结果标记引物法的荧光信号最强,随机渗入标记法的荧光信号强度次之,其Cy5-dUTP最佳浓度为0.1 mmol/L(dTTP:Cy5-dUTP=10∶1),末端转移标记法反应时间在60 min和120 min时荧光信号值相近.点样的探针浓度达到31μmol/L以上,荧光信号为平台期.结论明确了三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响,有助于选择寡核苷酸芯片的荧光标记方法.

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