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长白山林下参基因组DNA提取及RAPD体系的优化

         

摘要

采用改良的CTAB法提取林下参的基因组DNA,所得的DNA纯度高、质量好,可用于RAPD分析.筛选出的林下参RAPD反应的最佳体系为20μL,反应体系中包括模板DNA20ng,引物20pmol,dNTPs 0.1875mmol/L,TaqDNA聚合酶1.5U,Mg2+2.0 mmol/L,10×Reaction Buffer2.0mmol/L ,其余部分用无菌超纯水补充.PCR扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸2min,40次循环,72℃最终延伸7min.应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好,为通过分子标记获得丰富的林下参遗传信息奠定了基础.

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