人鸟氨酸脱羧酶抗酶1突变基因的克隆与原核表达

蔡富强; 韩钰; 王艳林

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克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶1(Homo sapiens ornithine decarboxylase antizyme 1,HOAZ1)开放性阅读框+1核糖体移码位点缺失的突变基因,构建突变基因的原核表达质粒,分离纯化其原核表达的重组蛋白.采用巢式-PCR和重叠延伸-PCR技术,从人非小细胞肺癌细胞株A549的cDNA中获得人类鸟氨酸脱羧酶抗酶1开放性阅读框+1核糖体移码(+1RF)位点缺失突变的基因序列(DM-HOAZ1).将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)后,转化表达菌Rosseta(DE3)感受态细胞.阳性克隆用IPTG诱导重组蛋白表达,然后在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组HOAZ1.原核表达和纯化的HOAZ1重组蛋白用Western Blot鉴定.结果显示,成功获得HOAZ1开放阅读框中+1RF位点缺失的突变基因和该突变基因的原核表达质粒pET-28a(+)/DM-HOAZ1;用pET-28a(+)/DM-HOAZ1转化大肠杆菌后,HOAZ-1可被IPTG诱导性高表达,且表达量随诱导时间延长递增;原核表达的HOAZ1可用Ni-NTA树脂亲和层析有效纯化.建立了原核表达和分离纯化HOAZ1蛋白的试验方法,为进一步研究HOAZ1的功能和临床应用奠定了基础.

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来源
《生物技术通报》 |2010年第2期|149-153|共5页
作者
蔡富强; 韩钰; 王艳林;
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作者单位

三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002;

三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002;

三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002;

三峡大学医学院,宜昌,443002;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
鸟氨酸脱羧酶抗酶1; 突变; 原核表达;

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