转基因番木瓜基因组DNA的快速制备和PCR检测方法

潘志文; 陈伟庭; 高洁儿; 周峰; 姚涓; 王声斌; 姜大刚

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转基因番木瓜基因组DNA的快速制备和PCR检测方法

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转基因番木瓜检测中,模板DNA的制备是关键一步.为了提高检测效率,建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要.建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法,包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清.在完成不同番木瓜样品的基因组DNA快速制备后,对获得的DNA进行PCR检测验证.普通PCR验证结果显示,本方法制备的叶片和果肉基因组DNA溶液稀释5倍时,PCR扩增条带清晰,更高稀释倍数时,叶片基因组DNA扩增条带强于果肉基因组DNA;实时荧光PCR验证结果显示,叶片基因组DNA的PCR扩增效率位于合理区间.灵敏度测试结果表明,含量低至0.1％的叶片和果肉样品,内标准基因和外源基因特异性片段普通PCR和实时荧光PCR均能得到预期扩增,且重复性较好.本研究建立的番木瓜基因组DNA快速制备与PCR方法效果良好,体系稳定.

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来源
《生物技术通报》 |2021年第6期|286-294|共9页
作者
潘志文; 陈伟庭; 高洁儿; 周峰; 姚涓; 王声斌; 姜大刚;
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作者单位

农业农村部植物及植物用微生物生态环境安全监督检验测试中心(广州)/华南农业大学生命科学学院广州510642;

农业农村部植物及植物用微生物生态环境安全监督检验测试中心(广州)/华南农业大学生命科学学院广州510642;

农业农村部植物及植物用微生物生态环境安全监督检验测试中心(广州)/华南农业大学生命科学学院广州510642;

农业农村部植物及植物用微生物生态环境安全监督检验测试中心(广州)/华南农业大学生命科学学院广州510642;

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正文语种 chi
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关键词
转基因番木瓜; DNA制备; PCR; 检测方法;

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