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p53蛋白及其突变体对RhoE基因转录调控的影响

         

摘要

目的:探索p53蛋白及其突变体对RhoE基因转录调控的影响。方法:构建pEGFP-wt-p53质粒,利用基因定点突变PCR技术构建p53单点和双点突变体质粒,构建pGL3-RhoE-promotor-Luc质粒。以P21基因的启动子序列(P21-promoter-luc)为阳性对照,EGFP-N1空载体为阴性对照,将野生型和突变型p53质粒瞬时转染PC3(p53-null)细胞,利用双荧光素酶报告基因和Westernblot方法检测p53蛋白及其突变体蛋白在转录水平和蛋白水平对RhoE基因表达的影响。结果:电泳及测序表明以上质粒均构建成功。双荧光素酶报告基因检测显示野生型p53蛋白可调控RhoE基因转录,但其突变体丧失对RhoE的转录调控作用(P0.05)。Western blot结果与基因转录结果一致。结论:RhoE是受p53蛋白调控的基因之一,而p53突变体失去了在转录水平调控RhoE表达的作用。

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