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基于点击化学反应的免疫荧光检测方法的建立和应用

         
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报道了一种新型免疫荧光标记方法及其在细胞荧光检测中的应用.首先,合成了2个关键的化合物6-叠氮-己酸琥珀酰亚胺活性酯和4-乙炔基-N-乙基-1,8.萘酰亚胺,并将合成的6-叠氮-己酸琥珀酰亚胺活性酯与抗her2抗体Anti-HP15的游离氨基偶联获得叠氮化IgG;随后通过铜离子催化4-乙炔基-N-乙基-1,8-萘酰亚胺中的炔基与标记抗体的叠氮基团进行点击化学反应,同时以NHS-FITC和NHS-Rhodamine标记的抗体为阳性对照,测定了该标记方法的灵敏度,其检出限可达0.1μg,EC50结果与阳性对照相当.然后,在细胞水平上进行染色分析.结果表明,叠氮标记抗体可有效应用于免疫荧光染色分析.最后,采用激光共聚焦三通道复合荧光分析法对不同标记方法及其对应的免疫荧光显色方法进行了研究,确认采用本文方法标记的抗体可与其它免疫荧光技术同时使用,且结果互不干扰.本研究通过开发一种新型的抗体标记技术,建立了一种新的免疫荧光抗体分析方法,并在细胞水平上进行了应用验证,丰富了免疫荧光抗体检测手段.该方法在未来的免疫研究中具备发展潜力和广泛的应用前景.

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