中国麇鹿朊蛋白核心片段的原核克隆表达与纯化

刘玉亮; 刘雨田; 胡国良; 郭小泉; 孙成友

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中国麇鹿朊蛋白核心片段的原核克隆表达与纯化

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从采取的新鲜麋鹿血液中提取麋鹿基因组DNA,通过PCR的方法从麋鹿基因组中扩增麋鹿PrP蛋白核心片段的DNA,并分别在引物的5'和3'端引入EcoR I和Hind Ⅲ两个酶切位点,下游引物将原序列TATTAC突变为TAATAA变成两个终止密码子.通过两个酶切位点将麋鹿PrP蛋白核心片段DNA连接到pET-32a(+),转化DH5α,通过酶切鉴定和PCR鉴定,筛选出阳性克隆送菌液测序,从测序结果分析阳性克隆是否符合要求.测序正确后将核心片段基因连接到pET-32a(+),阳性质粒命名为MPrP-pET-32a(+),阳性质粒转化E.coli BL21(DE3),进行诱导表达、蛋白质纯化鉴定.

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来源
《中国动物检疫》 |2010年第11期|25-27|共3页
作者
刘玉亮; 刘雨田; 胡国良; 郭小泉; 孙成友;
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作者单位

中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛266032;

江西农业大学,江西南昌,330013;

中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛266032;

江西农业大学,江西南昌,330013;

江西农业大学,江西南昌,330013;

中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛266032;

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正文语种 chi
中图分类 S852.659.7;
关键词
PrP蛋白; 酶切; 转化; 诱导; 纯化;

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