人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1的克隆及其蛋白表达、纯化

招树涛; 徐永健; 陈浩云

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人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1的克隆及其蛋白表达、纯化

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目的克隆与人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1,并在大肠埃希菌中表达,最后进行蛋白纯化、鉴定.方法根据基因库中收录的Caveolin-1基因序列,设计其上下游引物,经过PCR反应合成Caveolin-1双链,然后与pET28a(+)载体重组,筛选阳性克隆并对DNA序列分析鉴定.将已构建好的重组质粒pET28a-Caveolin-1转入化大肠埃希菌BL21 (DE3),异丙基硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达,表达产物经镍离子亲和层析(Ni2+-NTA)纯化,SDS-PAGE检测和Western blot鉴定.结果 PCR扩增的Caveolin-1 DNA片段经鉴定确认为人Caveolin-1基因.经异丙基硫代半乳糖苷诱导的含有pET28a-Caveolin-1重组质粒的DE3菌表达出重组人Caveolin-1融合蛋白.重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化,获得了较高纯度的融合蛋白.结论本研究成功克隆了人血脑屏障通透性相关基因Caveolin-1,并对其进行蛋白表达、纯化,获得了较高纯度融合蛋白,为进一步的相关临床研究奠定了基础.

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来源
《中国医药导报》 |2018年第32期|13-1523|共4页
作者
招树涛; 徐永健; 陈浩云;
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作者单位

广州中医药大学金沙洲医院重症医学部;

广东广州510168;

广州中医药大学金沙洲医院重症医学部;

广东广州510168;

广州中医药大学金沙洲医院重症医学部;

广东广州510168;

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正文语种 chi
中图分类动脉疾病;
关键词
血脑屏障; 通透性相关基因; Caveolin-1; 克隆; 表达; 纯化;

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