基于蛋白质组学的细胞色素P450和葡萄糖醛酸转移酶亚型绝对定量分析

刘喜东; 朱俊; 丛宇婷; 胡良海; 叶明亮; 顾景凯; 邹汉法

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基于蛋白质组学的细胞色素P450和葡萄糖醛酸转移酶亚型绝对定量分析

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利用蛋白质组学方法,将大鼠肝微粒体样品进行胰蛋白酶水解;再利用液相色谱-串联质谱法(LCMS/MS),采用多反应监测模式(MRM),通过测定蛋白质水解后产生的特征酶切肽段,实现同时对大鼠肝微粒体内药物代谢酶P450和UGT的绝对定量.本实验首先建立标准工作曲线,对肝微粒体样品中P450和UGT进行定量,在线性范围内,相关系数r＞0.995,线性关系良好,定量限≤10 nmol/L;以合成的稳定同位素标记特征肽段作为内标,对UGT1A1进行定量分析.结果表明,同位素标记特征肽段与未标记肽段色谱行为与质谱响应一致,在基质溶液中同位素标记肽段线性关系良好,利用标准曲线法和稳定同位素稀释法测得UGT1A1含量分别为17.30和18.23 nmol/g,两种方法所得结果基本一致,但稳定同位素稀释法操作简便,更适用于复杂样品的高通量测定.

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来源
《分析化学》 |2014年第1期|10-15|共6页
作者
刘喜东; 朱俊; 丛宇婷; 胡良海; 叶明亮; 顾景凯; 邹汉法;
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作者单位

吉林大学生命科学学院,长春130012;

中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析化学重点实验室,大连116023;

吉林大学生命科学学院,长春130012;

吉林大学生命科学学院,长春130012;

中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析化学重点实验室,大连116023;

吉林大学生命科学学院,长春130012;

中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析化学重点实验室,大连116023;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
葡萄糖醛酸转移酶; 多反应监测; 肝微粒体; 细胞色素P450; 气相色谱-串联质谱;

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