肝微粒体

摘要： 采用体外肝微粒体孵育实验研究氯丙嗪在鼠、猪、鸡肝微粒体的代谢速率及代谢产物。利用液相色谱-串联质谱测定不同时间点氯丙嗪的峰面积,计算氯丙嗪的体外代谢率、代谢半衰期(T_(1/2))及固有清除率(CLint),通过氯丙嗪及其代谢产物的保留时间、碎片离子等信息,推断氯丙嗪的代谢产物和代谢途径。结果表明,在猪、鼠、鸡肝微粒体孵育体系中,氯丙嗪的T_(1/2)分别为18.2、173.3、346.5 min,CLint分别为76.2、8.0、4.0μL/(min·mg)。在3种肝微粒体孵育体系中共发现8种代谢产物,在鼠、猪和鸡肝微粒体孵育体系中分别发现5种、7种和4种氯丙嗪代谢产物,均检测出产物氯丙嗪亚砜、去甲基氯丙嗪、6-羟基氯丙嗪和7-羟基氯丙嗪。氯丙嗪在肝微粒体孵育体系中的代谢途径以氧化、羟基化和去甲基反应为主,其在猪肝微粒体孵育体系中代谢和清除速度最快,其次是鼠、鸡,在不同种属肝微粒体孵育体系中代谢产物的种类和含量存在差异。

摘要： 目的:研究苍耳子炮制前后对小鼠肝微粒体中CYP1A2和CYP3A4酶相对活性及肝细胞损害程度的影响。方法:49只小鼠按体质量随机分为正常组、苍耳子生品低剂量组、苍耳子生品中剂量组、苍耳子生品高剂量组、苍耳子炮制品低剂量组、苍耳子炮制品中剂量组、苍耳子炮制品高剂量组,每组7只。各给药组小鼠灌胃分别相应药物水煎液,正常组小鼠灌胃等体积的生理盐水,1次/d,连续10 d。运用Cooktail探针法将咖啡因(CYP1A2酶反应物)、咪达唑仑(CYP3A4酶反应物)、地西泮(内标物)和肝微粒体一同进行体外孵育,HPLC法测定肝微粒体中两种探针药物的消耗,计算酶的相对活性;ELISA法测定血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平;肝组织HE染色切片进行病理观察。结果:苍耳子生品中、高剂量组和苍耳子炮制品高剂量组小鼠血清AST、ALT活性均高于正常组(P0.05);小鼠肝组织HE染色病理切片显示在相同剂量下苍耳子生品组比苍耳子炮制品组小鼠肝损伤情况更严重;苍耳子生品中、高剂量组和苍耳子炮制品中、高剂量组小鼠肝脏微粒体中CYP1A2活性均明显高于正常组(P0.05)。CYP1A2和CYP3A4酶相对活性与血清生化指标检测和肝组织病理切片观察结果有相同的趋势,即CYP1A2、CYP3A4酶相对活性越高,肝损害越严重。结论:苍耳子能够诱导CYP1A2、CYP3A4酶的活性,炮制后可降低对CYP1A2、CYP3A4酶的诱导作用,同时减轻肝损伤,可能是其炮制减毒的机制之一。

摘要： 目的通过UPLC-HRMS检测分析体外人肝微粒体模型中合成大麻素类新精神活性物质AB-CHMINACA的代谢物并与一例真实滥用者的尿液样本进行对比,从而对体外人肝微粒体模型预测体内代谢物的一致性进行评价研究。方法通过建立体外人肝微粒体孵育模型模拟人体体内代谢过程,尿液样本经简单的乙腈沉淀蛋白后利用高分辨质谱(HRMS)分析体内代谢物以确定代谢发生位点、代谢途径和体内尿液标志物。结果AB-CHMINACA在人肝微粒体体外模型中共生成了10种代谢产物,其主要代谢途径为甲酰胺水解、甲基丙基侧链羟化、N-脱烷基和酰胺水解。其中,甲酰胺水解代谢物M1、甲基丙基侧链羟化代谢物M4和N-脱烷基合并甲酰胺水解代谢物M10在AB-CHMINACA滥用者的尿液样本中均有发现。结论该体外代谢模型实验方法简便快捷,可在一定程度上预测AB-CHMINACA的体内代谢物。推荐AB-CHMINACA的甲酰胺水解代谢物和甲基丙基侧链羟化代谢物作为AB-CHMINACA滥用者尿液样本分析的生物标志物。

摘要： 为研究4′-氯地西泮和二氯西泮在人体内的代谢产物,本研究通过体外温孵体系肝微粒体代谢模型进行实验,在Wistar大鼠雌雄混合肝微粒体中分别加入4′-氯地西泮和二氯西泮对照品各1μg,模拟人体内的代谢过程孵育4 h后,采用Agilent Eclipse plus C18色谱柱(100 mm×2.1 mm×5μm)进行分离,以20 mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸-5%乙腈(A)和乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,液相色谱-Q-Exactive组合型四极杆Orbitrap质谱(LC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)对肝微粒体温孵体系中的Ⅰ相、Ⅱ相代谢产物及其代谢途径进行分析。结果表明,4′-氯地西泮经过代谢共产生5种Ⅰ相代谢产物和2种葡萄糖醛酸化的Ⅱ相代谢产物,二氯西泮经过代谢共产生6种Ⅰ相代谢产物和1种葡萄糖醛酸化的Ⅱ相代谢产物,包含的主要代谢途径为脱烷基化、羟基化以及与葡萄糖醛酸结合,代谢产物的不同可能来源于氯原子的取代位置。本研究阐述了4′-氯地西泮和二氯西泮在大鼠肝微粒体体外温孵体系中的代谢产物、代谢途径以及代谢特点,可为临床医学及法医学实验室相关案件的检测提供参考。

摘要： 目的比较松脂醇二葡萄糖苷在人和大鼠肝微粒体中的代谢。方法将人和大鼠肝微粒体在体外分别与松脂醇二葡萄糖苷共同孵育,高效液相色谱串联四极杆质谱(HPLC/QQQ-MS)法分析该成分及其代谢产物,二级质谱扫描来推测化学结构。结果最佳条件为肝微粒体质量浓度20 mg/mL,孵育时间120 min,松脂醇二葡萄糖苷在人和大鼠肝微粒体中的代谢率分别为9.4%和4.8%。松脂醇二葡萄糖苷发生脱糖反应生成松脂素,后者进一步发生氧脱甲基、脱羟基、开环生成不同代谢产物。结论松脂醇二葡萄糖苷能在人和大鼠肝微粒体中发生代谢,并存在种属差异性,肝微粒体代谢可增加该成分疏水性。

摘要： 采用UPLC-QE-Orbitrap-MS检测方法,通过比较2,5-二甲氧基呋喃[4″,5″:3,4]查耳酮(1)在体外大鼠、小鼠、恒河猴、Beagle犬和人五个种属肝微粒体体系中孵育0 min和60 min的样品,以及比较静脉注射该化合物及空白的C57小鼠的血浆、粪便、尿液样品,研究其在体内外代谢产物。初步推断孵育后体外代谢产物有M1、M2共2种,体内代谢产物M1、M2、M3、M4、M5共5种,并且M5为M1进一步代谢而来,采用化学合成方法制得代谢产物M1。将大鼠随机分组并给药,于设定的系列时间点取血,采用超高速液相色谱质谱联用(UFLC-MS/MS)检测方法,测定1及M1血药浓度,定量研究该化合物及M1在大鼠体内的变化趋势并计算药代参数。用DAS 2.0软件计算药代动力学参数,1的C_(max)=405.96μg/L,Tmax=0.083 h,AUC_(0-t)=190.64μg/(L·h),T_(1/2)=3.74 h,M1的C_(max)=281.291μg/L,T_(max)=0.083 h,AUC_(0-t)=561.30μg/(L·h),T_(1/2)=3.01 h。研究结果表明,2,5-二甲氧基呋喃[4″,5″:3,4]查耳酮在体内代谢过程中主要发生了还原、去甲基、开环、加羟基等反应,其中主要代谢产物为M1,并且M1进一步代谢为M5,本研究为揭示其药理药效作用奠定了物质基础。

摘要： 建立测定肝微粒体孵育体系中刺囊酸的方法,并比较其在不同种属肝微粒体(大鼠、比格犬、人)中的代谢消除速率。使用NADPH将不同种属肝微粒体在孵育体系中进行激活。孵育60 min后,刺囊酸在大鼠、比格犬、人肝微粒体中的平均剩余浓度百分比的比率为44.65%、99.25%、99.73%。大鼠肝微粒体中的刺囊酸的代谢稳定性比在人和比格犬肝微粒体中的代谢稳定性差。本研究建立的HPLC测定方法简便,快速,灵敏度高,可应用于体外生物代谢稳定性的相关研究。

摘要： 本文目的是研究对羟基苯甲酸丙酯(羟苯丙酯;propylparaben,PP)和对羟基苯甲酸丁酯(羟苯丁酯;butylparaben,BP)对大鼠肝微粒体(rat liver microsomes,RLM)和人肝微粒体(human liver microsomes,HLM)细胞色素P450酶(cytochrome P450 enzyme,CYP)活性的抑制作用,并评价它们的相互作用潜能。在体外将系列浓度的羟苯丙酯和羟苯丁酯与大鼠和人肝微粒体孵育60 min,以非那西丁、安非他酮、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、香豆素、右美沙芬和咪达唑仑为CYP探针底物,应用质谱定量检测各探针底物的代谢产物生成量,计算得到IC 50和K i值,评价2种化学受试物对大鼠和人肝微粒体CYP450酶的抑制活性和抑制类型,并对抑制强度进行分级。大鼠和人肝微粒体中羟苯丙酯是CYP1A2酶的中等强度抑制剂,羟苯丁酯在大鼠肝微粒体中是CYP1A2酶的弱抑制剂,在人肝微粒体中是CYP1A2酶的中等强度抑制剂,观察到对其他CYP450酶无抑制作用,这与用软件预测的羟苯丙酯和羟苯丁酯对CYP450酶的抑制种类结果一致,分子对接的结果也印证了羟苯丙酯和羟苯丁酯对CYP1A2酶活性的抑制作用,按照构效关系和同源CYP的物种敏感度预测模型,本文关于CYP的研究结果可以类推到其他哺乳动物和人类。

摘要： 目的 研究木兰花碱在大鼠体内外的主要代谢产物及代谢途径.方法 SD大鼠ig木兰花碱(50mg/kg),收集0?24h尿液和粪便,0?6h胆汁以及1、2、4、6、8h血浆;体外代谢采用肝微粒体温孵系统和肠菌培养液.利用LC-MS/MS对生物样品中的原型药及代谢产物进行鉴定.采用Agilent TC-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,体积流量1.0mL/min,柱温30°C.质谱采用电喷雾电离源(ESI),正离子采集模式;扫描范围m/z 100?1 000.根据药物体内代谢规则,结合木兰花碱的色谱保留时间和多级质谱碎片离子特征,推测其代谢产物的结构.结果 给药后生物样品中共鉴定出12个代谢产物,其中Ⅰ相代谢产物8个,Ⅱ相代谢产物4个.主要的代谢途径为羟基化、去甲基化、脱氢作用、酮基化、葡萄糖化、葡萄糖醛酸化及硫酸酯化.结论 木兰花碱在体内可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,肠道菌群和肝药酶可催化木兰花碱发生Ⅰ相代谢转化,Ⅱ相代谢存在于肠道以外部位,最有可能的部位是肝脏.

摘要： 通过钙沉淀法制备大鼠肝微粒体,将3-羟基苯乙酸、4-羟基苯乙酸、3,4-二羟基苯乙酸与4种亚型酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4)的特异性探针药物(非那西丁、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、睾酮)在体外孵育,应用高效液相色谱法检测探针底物浓度,间接获得相对酶活性和计算半数抑制浓度(IC 50),从而对不同羟基位点苯乙酸对大鼠肝微粒体主要的CYP450酶系活性进行评价。发现不同羟基位点苯乙酸对大鼠肝微粒体主要的4种CYP450酶无抑制作用,药效作用安全,可为药物合成奠定基础。

摘要： 目的：研究马钱子碱(BRU)与士的宁(STR)单体、马钱子总碱和马钱子提取物中活性成分BRU与STR在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学,考察BRU与STR单体、总生物碱和提取物中的BRU与STR在大鼠肝微粒体中的代谢差异. 方法：采用LC-MS/MS法测定单体、总生物碱和提取物在体外代谢系统中马钱子碱和士的宁的含量变化,并计算其酶促反应动力学参数. 结果：与单体组相比,马钱子总碱和提取物中两种单体成分的Vmax和Km值均显著降低;与马钱子总碱相比,马钱子提取物中两种单体成分的Vmax和Km值均显著升高.马钱子总碱组、单体成分组中和马钱子提取物组中的BRU的CLint无明显差异;而三者中STR的Clint依次减少. 结论：马钱子总碱、马钱子提取物中的BRU和STR及BRU与STR单体均可被肝微粒体代谢,且各组中BRU和STR的代谢具有明显差异.

摘要： 目的:研究大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性作用的影响. 方法:利用大鼠肝微粒体对何首乌水提物进行体外代谢;将何首乌水提物代谢前后溶液冷冻干燥,以不同浓度(1.5、3、6、12mg生药/mL)作用肝源L02及HepG2细胞24h、48h,MTT法检测其对两种细胞的细胞活力的影响;HPLC测定12mg生药/ml溶液中3种主要成分(二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素)的含量变化. 结果:浓度为12mg生药/mL的何首乌水提物未代谢组毒性大于何首乌水提物代谢组(P<0.01);含量测定结果显示,何首乌水提物代谢组与未代谢组相比,3种主要成分含量明显降低. 结论:何首乌水提物经大鼠肝微粒体代谢后对肝细胞毒性降低,与其主要成分含量降低之间的关系需要进一步研究.

摘要： 亲脂性外源化合物,比如溴代阻燃剂(BFRs)进入生物体后,往往会被肝脏中的代谢酶催化生成亲水性的代谢产物,通过尿和胆汁排泄出体外,其中细胞色素P450酶系(CYP450)是BFRs的主要代谢酶系之一.本研究开展了部分典型BFRs的肝微粒体(鸡和猫)体外代谢实验.鸡的微粒体代谢实验结果可以为鸟类的BFRs代谢提供参考数据.猫不仅可以代表猫科动物,由于其生活环境和人类一致,也可以用来指示人的室内污染物暴露情况,通过猫肝微粒体代谢的实验结果可以初步了解猫对于多溴联苯醚PBDEs和HBCD的代谢能力和代谢产物模式,也为猫是否能作为室内污染的指示生物的研究提供有用信息.

摘要： 胡椒碱、荜茇明宁碱和墙草碱是荜茇中主要的酰胺类成分,具有多种药理活性,为了阐明这3种成分在5个不同种属肝微粒体中代谢差异,应用超高效液相色谱串联双压线性离子阱静电场轨道阱质谱(UHPLC-LTQ-Orbitrap MS)采集这3种化合物的全扫描图谱及二级三级质谱图,获取碎片离子信息,结合其质谱裂解规律和代谢产物精确质谱数据,比较3种生物碱分别在人、恒河猴、比格犬、大鼠以及小鼠肝微粒体中的代谢差异,并快速鉴定出3个胡椒碱代谢产物、2个荜茇明宁碱代谢产物及1个墙草碱代谢产物.结果显示荜茇中酰胺类生物碱的主要代谢类型为苯环亚甲二氧基开环脱甲基和氧化反应,且在种属间存在代谢率差异,该研究为进一步阐明荜茇中胡椒碱类成分体内代谢途径提供了实验依据.

摘要： 目的：采用超高效液相色谱法(UPLC)研究钩吻素子在肝微粒体的体外代谢,探讨和比较钩吻素子在人与猪、大鼠、猴、犬细胞色素P450酶系代谢特征及其酶抑制剂的影响,为开展体内研究的动物模型选择提供科学依据.rn 方法：通过比较理论塔板数、分离情况及峰面积等指标,建立钩吻素子代谢的UPLC测定条件;通过对孵育时间、肝微粒体蛋白含量和钩吻素子浓度等条件的考察优化钩吻素子与肝微粒体的反应体系;在优化条件下进行钩吻素子在各种属肝微粒体中孵育和测定,比较其在各种属的代谢产物种类和相对生成量、酶动力学特征等差异,以及特异性CYP450酶抑制剂对反应系统中代谢产物相对生成量变化的影响.rn 结果：色谱条件：安捷Poroshell HPH-C18液相色谱柱(2.1mm×100mm,2.7μm),检测波长256nm,测定条件下灵敏度、分离度高,方法学考察显示日内精密度、日间精密度良好,RSD分别小于2.42％和3.61％,回收率大于90％,钩吻素子及各代谢物均能有效分离,钩吻素子保留时间为4.01min,主要代谢物保留时间为1.85min.经全波长扫描(190-400nm)显示连续波长下各成分的构成和分布,表明检测波长256nm下可代表所有代谢产物的分布情况.钩吻素子在人、猪、大鼠、猴、犬肝微粒体的代谢产物分别可检测到2、2、6、6、7种,主要代谢产物(代谢物Ⅴ)相同,占各种属所有代谢物的百分比分别为97.73％、58.09％、89.53％、90.40％和79.06％;其他代谢产物中,除了猪的1个(占41.91％)、犬的2个(分别占6.69％和7.35％)以外,均在3％以下.钩吻素子在人肝微粒体代谢较慢,且仅代谢22.28％,而在犬、猴代谢近50％.在人肝微粒体钩吻素子的酶动力学参数Km、Vmax、T1/2分别为0.15mmol·L-1、0.0055μmol·L-1·min-1和12.01h;猪、大鼠、猴和犬肝微粒体中分别为Km0.44、0.094、0.018和0.73mmol·L-1,Vmax0.014、0.037、0.025和0.061μmol·L-1·h-1·g-1,T1/27.09、3.26、1.80和2.49h.酮康唑在人和不同种属均可显著抑制钩吻素子体外代谢,在人、猪、犬中为强抑制(IC50＜1μmol·L-1),在大鼠、猴为中等抑制(IC50介于1～10μmol·L-1),酮康唑是CYP3A的特异性抑制剂,表明CYP3A是各种属中钩吻素子的主要代谢亚酶.噻氯匹定、奎尼丁和磺胺苯吡唑对大鼠,以及噻氯匹定对猴和犬的钩吻素子体外代谢IC50均高于10μmol·L-1,表明在体情况下CYP2B、CYP2D和CYP2C与钩吻素子的代谢的可能无关.rn 结论：不同种属肝微粒体对钩吻素子的代谢具有一定的差异,从主要代谢产物分布来看,猪与人的差异显著,大鼠、猴、犬与人相近,但其他代谢产物的构成方面各种属间均有一定的差异,代谢速率和代谢率高低顺序为：猴、犬、大鼠、猪、人.钩吻素子在人和各动物种属(猪、大鼠、犬、猴)肝微粒体中代谢主要由CYP3A酶催化.

摘要： 目的：研究棉酚在大鼠肝微粒体中的代谢产物.方法：首先以大鼠肝微粒体温孵棉酚,然后采用UPLC-LTQ-Orbitrap MS法对温孵体系中的代谢产物进行分析.结果：在大鼠肝微粒体温孵体系中共检测除原型在外的2个代谢产物,主要为羟基化的代谢产物.结论：本研究结果为进一步研究棉酚在体内的代谢和代谢酶奠定基础.

摘要： 目的：采用液质联用技术鉴定大鼠灌胃欧前胡素后尿液、粪便、胆汁及肝微粒体孵化液中的代谢产物,并探讨体内代谢与肝微粒体转化的相关性. 方法：联合应用MRM/MIM-IDA-EPI(多离子监测-信息依赖-增强型子离子扫描)、PREC-ER-IDA-EPI(母离子扫描-增强分辨率扫描-信息依赖-增强型子离子扫描)和EPI(增强型子离子扫描)多种模式,依据PREC-ER-IDA-EPI中的[M+H]+和[M+NH4]+离子判断代谢物的分子量,结合3种模式的EPI信息对代谢物进行结构表征. 结果：共鉴定出尿样中31个代谢物,粪样中14个代谢物,胆汁中6个代谢物以及肝微粒体转化17个代谢物. 结论：欧前胡素主要由肝脏代谢并经肾脏排泄.体外肝微粒体孵化结果与体内代谢比较表明,欧前胡素体内外代谢具有较好的相关性.

摘要： 目的：研究厚朴抗炎有效成分(E)-5-ally1-3'-(prop-1-enyl)bipheny1-2,4'-diol(HK-1)在人、大鼠、比格犬、猴和小鼠5个种属肝微粒体中的代谢稳定性,确定HK-1在大鼠肝微粒体中代谢表型. 方法：将HK-1在人、大鼠、比格犬、猴和小鼠5个种属肝微粒体中孵育,采用UPLC-MS/MS检测方法,通过测定HK-1的剩余浓度,考察HK-1在该5个种属肝微粒体中的代谢稳定性并外推其体内代谢清除率,通过化学抑制剂法鉴定在大鼠肝微粒体中HK-1的代谢表型. 结果：HK-1在人、大鼠、比格犬、猴和小鼠5个种属肝微粒体中均有不同程度的代谢,其t1/2分别为9.04、7.36、2.17、4.94、18.09min;CLint分别为153.40、188.20、639.02、280.60、76.60mL/(min·mg蛋白);CL'int分别为151.87、338.76、949.21、416.69、301.61mL·(min·kg)-1.在大鼠肝微粒体中HK-1主要被CYP2E1、CYP2C、CYP1A2催化代谢. 结论：HK-1在肝微粒体中代谢很快,且在人和大鼠肝微粒体中代谢相似,HK-1由多种酶代谢,这将降低因体内某一种酶被诱导或抑制而导致严重不良反应的风险.

摘要： 目的：研究SD大鼠肝微粒体中,参与盐酸双苯氟嗪代谢的CYP450酶亚型.rn 方法：运用CYP450酶选择性抑制剂和重组酶实验探讨参与盐酸双苯氟嗪代谢的CYP450酶亚型.rn 结果：抑制剂研究和重组酶实验两种分析方法测定结果均显示,大鼠肝微粒体中,CYP2A1、CYP3A和CYP2C11是生成M1和 M5的酶亚型;代谢盐酸双苯氟嗪生成M2的CYP450酶按作用大小依次为CYP2A1、CYP3A、CYP2C11、CYP2E1和CYP1A2;转化盐酸双苯氟嗪生成M4的酶亚型活性高低依次为CYP2A1和CYP3A、CYP2E1和CYP2C11,重组酶实验结果表明,CYP3A2显示出比CYP3A1更强的活性.rn 结论：CYP3A和CYP2A1均参与了大鼠肝微粒体中4种代谢物的生成反应.

摘要： 目的:研究三七总皂苷主要成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对人肝微粒体CYP450酶的体外抑制作用.rn 方法:采用人肝微粒体体外孵育法,三种皂苷分别与不同的探针底物非那西丁(CYP1A2),双氯芬酸(CYP 2C9),S美酚妥因(CYP2C19),右美沙芬(CYP2D6),氯唑沙宗(CYP2E1),睾酮(CYP3A4)共同孵育,用LC/MS /MS法测定探针底物相应代谢产物的生成量反应对各亚酶活性的影响.rn 结果:人参皂苷Rg1 (2-1000μmol·L-1)对CYP1A2,2C9,2C19, 2D6,2El和3A4未见剂量相关的抑制作用;人参皂苷Rb1 (2-1000tmol·L-1)对CYP1A2,2C9和3A4酶未见剂量相关的抑制作用;对CYP2C19,2E1和2D6酶的半数抑制浓度分别为96.1 μmol·L-1,113.7μmol·L-1和86.7μmol·L-1.三七皂苷R1(2-1000μmol·L-1)对CYP1A2未见剂量相关的抑制作用;对CYP2C9,2C19,2D6,2E1和3A4的ICso分别为108.6μnol·L-1,86.8μmol·L-1,70.8μmol·L-1,106.5μmol·L-1和125.5μmol·L-1.rn 结论:人参皂苷Rg1对CYP1A2,2C9,2C19,2D6,2E1和3A4酶的活性无影响;人参皂苷Rb1对CYP 1A,2C9和3A4酶的活性无影响,对CYP 2C19,2D6和2E1有一定抑制作用;三七皂苷R1不影响1A2酶活性,对CYP 2C9,2C19,2D6,2E1和3A4酶有一定抑制作用.故不同组成比例的三七总皂苷制剂可能显示不同的药酶代谢影响结果,进一步提示制定统一的制剂质控标准的重要性.

摘要： 本发明公开一种肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，包括以下步骤：(1)将氯化石蜡溶于有机溶剂，得到氯化石蜡溶液，并向其中加入血清，静置平衡后得到底物体系；(2)向底物体系先后加入磷酸钾缓冲溶液、肝微粒体和NADPH酶再生体系，摇匀后得到最终反应体系，然后置于37°C水浴中振荡反应；(3)向步骤(2)的反应体系加入冰冷的有机溶剂终止反应，然后进行离心，取上层清液，测定氯化石蜡含量。本发明采用血清作为氯化石蜡的载体，促进氯化石蜡与肝微粒体反应，显著提高氯化石蜡的代谢清除率，实现肝微粒体离体代谢氯化石蜡的代谢清除率的测定。

摘要： 本发明公开血清作为在体外肝微粒体代谢体系中溶解卤代有机污染物试剂的用途，还提供了一种体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的方法。本发明解决现有技术中有机溶剂抑制代谢酶活性的问题，使体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的反应能更加真实地模拟出肝微粒体在体内的代谢转化情况，更能真实地反映出卤代有机污染物在动物体内的代谢特征。

摘要： 本发明公开了一种检测五种UGT酶活性的cocktail方法，选择五种UGT酶的专一性较强的底物，设置合适的浓度，进行底物相互作用考察，将相互作用较小的UGT1A1/Ugt1a1和UGT1A6/Ugt1a6酶的底物混合孵育，将UGT1A3/Ugt1a3，UGT1A9/Ugt1a9和UGT2B7/AZTG的底物混合孵育，最后测定UGT酶的活性。本发明检测五种UGT酶活性的cocktail方法可用于检测大鼠和人肝微粒体中的UGT酶的活性，具有高效、快速和全面的优点，可用于快速评价化合物对UGT酶活性的影响。

摘要： 本发明公开一种肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，包括以下步骤：(1)将氯化石蜡溶于有机溶剂，得到氯化石蜡溶液，并向其中加入血清，静置平衡后得到底物体系；(2)向底物体系先后加入磷酸钾缓冲溶液、肝微粒体和NADPH酶再生体系，摇匀后得到最终反应体系，然后置于37°C水浴中振荡反应；(3)向步骤(2)的反应体系加入冰冷的有机溶剂终止反应，然后进行离心，取上层清液，测定氯化石蜡含量。本发明采用血清作为氯化石蜡的载体，促进氯化石蜡与肝微粒体反应，显著提高氯化石蜡的代谢清除率，实现肝微粒体离体代谢氯化石蜡的代谢清除率的测定。

摘要： 本发明公开血清作为在体外肝微粒体代谢体系中溶解卤代有机污染物试剂的用途，还提供了一种体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的方法。本发明解决现有技术中有机溶剂抑制代谢酶活性的问题，使体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的反应能更加真实地模拟出肝微粒体在体内的代谢转化情况，更能真实地反映出卤代有机污染物在动物体内的代谢特征。

摘要： 本发明涉及一种人肝微粒体与细胞共培养体系及其构建方法和应用。人的肝源很难保证无菌，在制备人源肝微粒体时，几乎无法获得无菌的肝微粒。为了将人源肝微粒体与细胞共培养进行体外代谢试验研究，本发明提供了一种能够将有菌的人肝微粒体与无菌细胞直接接触的共培养方法，成功构建了人肝微粒体与细胞共培养体系。试验证明，本发明的构建方法能够保证人肝微粒体中的污染源无法对细胞的无菌环境造成影响，维持细胞正常生长的无菌状态。并且，该方法适用于外源物质(如烟碱、烟气)体外代谢研究，为人源肝微粒体与细胞共同作用的体外代谢研究奠定了基础。

摘要： 本发明涉及一种多细胞和人肝微粒体共培养方法、共培养培养基及其应用。本发明提供了多细胞和人肝微粒体共培养方法，包括收集细胞、接种细胞、装载人肝微粒体以及共培养步骤，首次实现了Beas‑2b、HUVEC、人肺巨噬细胞和人肝微粒体的体外共培养，为表征肺、血液循环、肝脏共同参与的暴露和代谢后再次损伤的研究奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种新化学实体在不同种属肝微粒体中代谢性能的检测方法，包括如下步骤：在包含缓冲液、肝微粒体、底物、MgCl2和NADPH的反应体系中，以底物的代谢率为参照，筛选出最适反应条件以得到人肝微粒体孵育体系。按照所述人肝微粒体孵育体系的建立方法，依次建立大鼠、小鼠、犬和猴肝微粒体孵育体系。将新化学实体在不同种属肝微粒体孵育体系中进行体外代谢测试，同时以底物进行阳性组反应，并设置不加NADPH的阴性组以及不加肝微粒体的空白组。测试后对代谢结果进行鉴定。本发明新化学实体在不同种属肝微粒体中代谢性能的检测方法，能够避免假阳性和假阴性结果的出现，提高鉴定结果的可靠性，为促进新药研发提供可靠的依据。

摘要： 本发明公开了一种肝微粒体孵育体系中睾酮及6β‑羟基睾酮检测平台的建立方法，包括如下步骤：采用甲醇稀释混合储备液，得到标准曲线工作液，任意一个浓度的标准曲线工作液中睾酮和6β‑羟基睾酮的浓度相同。采用肝微粒体孵育体系稀释标准曲线工作液，得到标准曲线样品。取100ng/mL的标准曲线样品，加入含卡马西平的甲醇沉淀剂，振荡、离心后，取上清加入超纯水，采用LC‑MS/MS进样分析。得出睾酮最优质谱条件和6β‑羟基睾酮最优质谱条件。设置睾酮最优质谱条件以及6β‑羟基睾酮最优质谱条件，将标准曲线样品采用LC‑MS/MS进样分析，得到睾酮线性回归方程和6β‑羟基睾酮线性回归方程。本发明方法缩短了分析时间，提高了检测效率，确保试验结果的准确性，并且符合方法学验证要求。

摘要： 本发明提供一种得到雷公藤甲素的肝微粒体体外代谢产物的实验方法，包括以下步骤：S1：制备大鼠肝微粒体；S2：将步骤1中制备的5μL肝微粒体，2μL的0.2mg/mL雷公藤甲素，20μL NADPH系统和0.05mM Tris/HCl组合，最终构成体积为200μL的微粒体体系；S3：将上述肝微粒体体系进行温孵，温孵时间点为0，15，60，90，120分钟；S4：取100μL步骤3中的温孵液加入10μL含1μg/mL的内标溶液，沉淀蛋白后，以12000rpm离心5分钟，取上清进行LC‑MS/MS的定量分析，进样量1μL；S5：剩余温孵液加入3倍体积的冷乙腈，12000rpm离心5分钟后，取全部上清于氮气条件下常温吹干，以100μL的甲醇：水，体积比为1：1复溶，用于代谢产物鉴定。