人Eppin基因的原核表达及抗原性鉴定

孙黎黎; 易维京; 吴玉章; 龙玲; 向云龙; 胡川闽; 梁志清; 何畏

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人Eppin基因的原核表达及抗原性鉴定

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目的构建人附睾蛋白酶抑制蛋白(epididymal protease inhibitor,eppin)基因原核表达质粒,表达并纯化重组蛋白,并探讨其抗原性及应用价值.方法以健康人睾丸组织cDNA为模板进行PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a,并转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定.结果重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后证实构建成功;SDS-PAGE结果显示表达产物为相对分子质量36KD的融合蛋白,Western印迹检测纯化后蛋白显示特异性条带.结论成功构建了pET-32a-Eppin重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Eppin蛋白,为进一步研究其生物学活性及免疫性避孕效应奠定了基础.

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来源
《中国男科学杂志》 |2010年第4期|7-10|共4页
作者
孙黎黎; 易维京; 吴玉章; 龙玲; 向云龙; 胡川闽; 梁志清; 何畏;
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作者单位

第三军医大学附属西南医院妇产科,重庆,400038;

第三军医大学检验系临床生化室;

第三军医大学全军免疫研究所;

第三军医大学附属西南医院妇产科,重庆,400038;

第三军医大学附属西南医院妇产科,重庆,400038;

第三军医大学检验系临床生化室;

第三军医大学附属西南医院妇产科,重庆,400038;

第三军医大学附属西南医院妇产科,重庆,400038;

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正文语种 chi
中图分类避孕方法;
关键词
附睾蛋白酶抑制蛋白; 避孕,免疫学; 质粒; 原核表达;

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