PiggyBac转座子介导的转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞的制备

何晓琳; 袁超; 屈雷; 陈玉林

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PiggyBac转座子介导的转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞的制备

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本研究旨在建立可稳定表达FGF5s的绒山羊胎儿成纤维细胞系.采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织cDNA中克隆FGF5s基因,构建PB转座子介导的真核表达载体PB-EGFP-FGF5s;在脂质体的介导下,将PB-EGFP-FGF5s载体和转座酶载体共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过嘌呤霉素进行稳定筛选.并利用PCR和RT-PCR鉴定FGF5s基因在细胞基因组中的整合及表达情况.结果表明,成功克隆了陕北白绒山羊FGF5s基因并构建了PB-EGFP-FGF5s真核表达载体;PCR结果显示,FGF5s已整合到细胞基因组中;RT PCR结果表明,该基因在转录水平上表达.另外,转染试验表明PB转座子可在绒山羊胎儿成纤维细胞中发生高效转座.本研究为制备绒山羊转基因细胞系提供了一种高效的方法,并为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊奠定了基础.

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来源
《畜牧兽医学报》 |2013年第12期|1926-1931|共6页
作者
何晓琳; 袁超; 屈雷; 陈玉林;
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作者单位

西北农林科技大学动物科技学院,杨凌712100;

西北农林科技大学动物科技学院,杨凌712100;

榆林学院生命科学研究中心,榆林719000;

西北农林科技大学动物科技学院,杨凌712100;

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正文语种 chi
中图分类山羊;繁殖生物技术;
关键词
陕北白绒山羊; FGF5s; PiggyBac转座子; 稳定转染;

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