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酵母双杂交筛选猪Calsarcin-3基因相互作用蛋白的研究

         
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摘要

旨在研究猪Calsarcin-3(CS3)基因及其互作蛋白对肌细胞钙离子的调控作用,了解快慢肌纤维分化和转化的分子机理.从猪的骨骼肌组织样中提取mRNA,合成并纯化双链cDNA;然后用长白猪的Calsarcin-3基因构建既无自激活活性又无毒性的pGBKT7-CS3诱饵载体;最后通过酵母双杂交系统的杂交方法筛选与Calsarein-3相互作用的蛋白,在GenBank中对相互作用基因进行比对分析,分析Calsarcin-3在骨骼肌中的功能.通过筛选,共筛选出5个与Calsarcin-3基因互作的蛋白,其中,重要的蛋白有帽蛋白Zβ(CAPZB)、肌联蛋白(TTN)和α-肌动蛋白1(ACTA1).结果提示,CAPZB可能与Calsarcin-3共同作用参与尖锐端肌动蛋白丝戴帽;ACTA1可能与Calsar-cin-3共同作用作为一种收缩蛋白在骨骼肌的活动中发挥重要作用;TTN能与Calsarcin-3结合参与维持Z线结构的稳定.%This work was conducted to study the regulation role of Calsarcin-3 (CS3) and its inter-action proteins on Calciumion signal transduction pathways and understand the molecular mecha-nisms of skeletal muscle fiber differentiation and development. The mRNA was extracted from the skeletal muscle of the adult Landrace and the purified ds-cDNA was obtained. The pGBKTT-CS3 bait vector without toxicity and auto-activation was constructed with the Calsarcin-3 gene of Landrace pig. ds-cDNA was amplified by long distance PCR. Finally, the Calsarcin-3 interaction proteins were screened through hybridization of bait vector with ds-cDNA prey library. Through the alignment of interaction genes in GenBank, the function of Calsarcin-3 was analyzed. In this study, five proteins interacting with CS3 were identified. These results indicated that the β cap-ping protein muscle Z-line(CAPZB) may regulate the growth of the actin filament by capping the barbed end of growing actin filaments with Calsarcin-3. Actin, alpha 1 (ACTA1) as a contractile protein may play a significant role in regulating the skeletal muscle activity with Calsarcin-3. Titin (TTN) may be involed in the structure of the Z-disk by binding with Calsarcin-3.

著录项

  • 来源
    《畜牧兽医学报》 |2009年第11期|1594-1599|共6页
  • 作者

    陈大雷; 朱文娟; 杨述林; 杨连玉; 崔文涛; 储明星; 马月辉; 李奎;

  • 作者单位

    中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室,北京,100193;

    吉林农业大学动物科技学院,长春,130118;

    中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室,北京,100193;

    华中农业大学动物医学院,武汉,430070;

    中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室,北京,100193;

    吉林农业大学动物科技学院,长春,130118;

    中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室,北京,100193;

    中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室,北京,100193;

    中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室,北京,100193;

    中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室,北京,100193;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 猪;生物技术遗传育种;
  • 关键词

    猪; 肌肉; Calsarcin-3; Z盘; 酵母双杂交;

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