猪白细胞介素-2在甲醇酵母中的表达

严琳; 陈焕春; 覃雅丽; 何启盖; 肖少波

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猪白细胞介素-2在甲醇酵母中的表达

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将猪白细胞介素-2(pIL-2)的完整cDNA序列克隆到甲醇酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC3.5K中,在E.coli体系中鉴定得到阳性克隆子pPIC3.5K-IL2.将pPIC3.5K-IL2经SacI线性化后,转化入经LiC1致敏的P.Pastoris GS115菌株中,得到的重组菌株经1%浓度甲醇诱导后,利用SDS-PAGE电泳,斑点杂交及去糖基化酶消化证实,在培养上清中获得了分泌型表达的猪白细胞介素-2(蛋白分子量约为20 KD),其表达量可达到80 mg/L.用CTLL-2细胞进行活性检测,生物学活性可达2×106 IU/ml.对其表达情况进行时间梯度分析,确定第5天表达量达到最高点,为最佳诱导时间;分析连续4个批次的重组菌株表达情况,结果表明重组菌株在适当菌体浓度下连续培养均能稳定、高效的表达外源蛋白pIL-2.本实验为进一步大规模生产pIL-2提供了理论依据.

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来源
《畜牧兽医学报》 |2004年第2期|208-212|共5页
作者
严琳; 陈焕春; 覃雅丽; 何启盖; 肖少波;
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作者单位

华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室,武汉,430070;

华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室,武汉,430070;

华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室,武汉,430070;

华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室,武汉,430070;

华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室,武汉,430070;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类兽医基础科学;
关键词
猪白细胞介素-2; 甲醇酵母; Pichia pastoris; 酵母表达;

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