猪细小病毒VP2基因的克隆、测序与原核表达

赵俊龙; 陈焕春; 吕建强; 肖少波; 周复春

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猪细小病毒VP2基因的克隆、测序与原核表达

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利用PCR技术从猪细小病毒的RF DNA模板中扩增了含有VP2全基因的2.0 kb的基因片段,将PCR产物克隆至pMD18-T载体,利用双脱氧末端终止法测定了VP2全基因的核苷酸序列.将所得的核苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与GenBank中的相应序列进行同源性比较,同源性均在99%以上,从而说明该蛋白的碱基序列和氨基酸序列均具有高度的保守性.将VP2全基因分别克隆入原核表达载体pET15(b)、pET17(b)和pET28(b)构建成表达质粒pET15bVP2、pET17bVP2和pET28bVP2;将含有VP2基因起始位点至EcoRⅠ切点间的0.8 kb片段克隆入pET17(b)中构建成表达质粒pET17bVP2f.利用上述四种质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况,结果发现pET17bVP2f质粒在45 kD处有一特异性表达带,而其它几种质粒均未看到特异性表达带,推测VP2基因3′端的某些结构可能对VP2全基因的表达有一定影响.这一结果对研究VP2基因的结构与功能具有重要意义.

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来源
《畜牧兽医学报》 |2003年第2期|195-198|共4页
作者
赵俊龙; 陈焕春; 吕建强; 肖少波; 周复春;
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作者单位

华中农业大学畜牧兽医学院病毒室,湖北,武汉,430070;

华中农业大学畜牧兽医学院病毒室,湖北,武汉,430070;

华中农业大学畜牧兽医学院病毒室,湖北,武汉,430070;

华中农业大学畜牧兽医学院病毒室,湖北,武汉,430070;

华中农业大学畜牧兽医学院病毒室,湖北,武汉,430070;

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正文语种 chi
中图分类鸡;
关键词
猪细小病毒; VP2基因; 基因克隆; 序列分析; 原核表达;

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