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调控牛CEBPA基因表达的miRNA筛选及对肌内前体脂肪细胞增殖和分化的影响

         
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摘要

旨在筛选并验证调控牛增强子结合蛋白A(CCAAT/enhancer binding protein alpha,CEBPA)表达的miRNA及其对肌内前体脂肪细胞增殖和分化的影响.本研究综合运用多个在线软件筛选与CEBPA基因具有潜在调控关系的miRNA,运用qRT-PCR技术检测CEBPA基因在关岭牛各类组织中的表达水平;构建CEBPA-3'UTR-WT和CEBPA-3'UTR-MUT双荧光素酶报告载体,通过双荧光素酶报告系统验证候选miRNA与CEBPA基因的结合关系;分离培养关岭牛肌内前体脂肪细胞,利用qRT-PCR、Western blot、油红O染色和CCK-8探究调控CEBPA的miRNA对牛肌内前体脂肪细胞分化与增殖的影响.生物信息学分析发现,bta-miR-23a、bta-miR-23b-3p、bta-miR-181a、bta-miR-181b、bta-miR-181c、bta-miR-181d与CEBPA 基因具有潜在结合关系;qRT-PCR结果表明,CEBPA基因在关岭牛内脏组织、肌肉组织、脂肪、下丘脑以及部分生殖器官中均有表达,在2岁牛背最长肌的表达量极显著高于1日龄犊牛(P＜0.01);双荧光素酶报告系统结果表明,bta-miR-23a、bta-miR-23b-3p、bta-miR-181a能直接结合牛CEBPA基因3'UTR;细胞试验结果表明,CEBPA基因在牛肌内前体脂肪细胞分化中的表达水平随时间逐渐升高,bta-miR-23a、bta-miR-23b-3p、bta-miR-181a在分化0d表达水平极显著高于其他时期(P＜0.01),整个分化时期bta-miR-23b-3p、bta-miR-181a与CEBPA 基因表达趋势相反;过表达miR-23a、miR-23b-3p、miR-181a均能极显著降低CEBPA基因mRNA和蛋白表达量(P＜0.01),并降低牛肌内前体脂肪细胞中脂滴含量;bta-miR-23a、bta-miR-23b-3p、bta-miR-181a能阶段性促进细胞增殖.结果表明,bta-miR-23a、bta-miR-23b-3p、bta-miR-181a能阶段性的促进牛肌内前体脂肪细胞增殖,并通过直接负调控CEBPA的表达来间接影响该细胞分化.

著录项

  • 来源
    《畜牧兽医学报》 |2021年第1期|52-65|共14页
  • 作者

    黄明捷; 陈祥; 张勇; 陈伟; 李俊; 陆静; 张雄; 何琦; 吴雨;

  • 作者单位

    贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室 贵阳550025;

    贵州大学动物科学学院 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室 贵阳550025;

    贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室 贵阳550025;

    贵州大学动物科学学院 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室 贵阳550025;

    贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室 贵阳550025;

    贵州大学动物科学学院 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室 贵阳550025;

    贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室 贵阳550025;

    贵州大学动物科学学院 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室 贵阳550025;

    贵州省种畜禽种质测定中心 贵阳550018;

    贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室 贵阳550025;

    贵州大学动物科学学院 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室 贵阳550025;

    贵州省农业科学院畜牧兽医研究所 贵阳550025;

    贵阳市花溪区农业局 贵阳550025;

    贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室 贵阳550025;

    贵州大学动物科学学院 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室 贵阳550025;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 S823.2;
  • 关键词

    CEBPA; miRNA; 肌内前体脂肪细胞; 细胞分化;

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