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外源性神经肽CART对大鼠海马神经元氧化应激的抵抗作用及机制研究

         
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旨在研究外源性神经肽可卡因-苯丙胺调节转录因子(cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)抵抗海马神经元氧化应激的效果及机制。本研究取初生24 h内大鼠海马进行神经元的原代培养,经纯度检测后,用200μmol·mL^(-1)过氧化氢诱导以构建氧化应激模型。在此基础上,分析CART对神经元活率、ATP含量、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和凋亡通路相关基因以及trkB基因表达的影响,并对trkB基因与凋亡相关蛋白和基因的表达进行相关性分析。结果显示,与对照组相比,H_(2)O_(2)组中的神经元活率及ATP含量极显著降低(P<0.01),MMP值显著降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,添加不同浓度的CART使海马神经元活率、ATP含量和MMP值显著增加(P<0.05)。与对照组相比,H_(2)O_(2)组中bax、caspase-3的mRNA水平极显著增加(P<0.01),bcl-2(P<0.01)、trkB(P<0.05)的mRNA水平分别极显著和显著降低;与H_(2)O_(2)组相比,CART+H_(2)O_(2)组中bcl-2的mRNA水平极显著升高(P<0.01),而trkB的mRNA水平显著升高(P<0.05),同时bax的mRNA水平显著降低(P<0.05),而caspase-3的mRNA水平则极显著降低(P<0.01)。Western blot分析结果显示,与对照组相比,H_(2)O_(2)组中bax、caspase-3的蛋白质水平显著升高(p<0.05),bcl-2、trkB的蛋白质水平显著降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,CART+H_(2)O_(2)组中bcl-2、trkB的蛋白质水平显著升高(P<0.05),而bax、caspase-3的蛋白质水平显著降低(P<0.05)。相关性分析结果显示,trkB基因与bax、caspase-3基因的表达呈显著负相关,而与bcl-2基因的表达呈显著正相关。结果提示,CART在增加氧化应激海马神经元中trkB基因表达水平的同时,可通过削弱凋亡信号通路抵抗海马神经元氧化应激。

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